不同化合物對鯉卵母細胞最終成熟相關基因表達的影響.pdf

1、卵母細胞發(fā)育調控是魚類生殖生理學的重要核心內容。卵成活率的高低一直是評價水產養(yǎng)殖業(yè)的一個主要的客觀因素，而卵母細胞最終成熟是卵子排出、成功受精的關鍵步驟。本研究采用卵母細胞體外培養(yǎng)實驗和熒光實時定量 PCR技術對鯉魚卵母細胞最終成熟分子機制及相關內分泌干擾物對鯉魚卵母細胞最終成熟過程影響的分子機制進行了研究。主要結果如下：
　　1.分析了在不同化合物培養(yǎng)下卵母細胞發(fā)生GVBD的情況。結果表明，DHP可直接促進鯉魚卵母細胞的最終成熟

2、；DES可能為DHP類似物，與DHP有著相似的作用，同樣可直接促進鯉魚卵母細胞的最終成熟；DEHP在單獨作用時，對鯉魚卵母細胞成熟有一定的抑制作用或沒有作用，但在加入DHP后，該抑制作用被很大的削弱。
　　2.運用Bestkeeper、geNorm、NormFinder、RefFinder等軟件篩選了不同化合物暴露下卵母細胞最終成熟過程中表達最穩(wěn)定的內參基因。結果表明，EF1α是DHP和DES誘導卵母細胞最終成熟過程中表達最穩(wěn)定的

3、基因；gapdh是DEHP誘導卵母細胞最終成熟過程中表達最穩(wěn)定的基因。經各候選內參基因分析LHR基因在DHP誘導卵母細胞最終成熟過程中的表達情況表明，在特定試驗條件下，最佳內參的篩選對于準確分析目的基因表達非常重要。
　　3.研究了DHP、DES和DEHP對鯉魚卵母細胞最終成熟過程中涉及的一些相關基因表達的影響。1）cyp19、mPRγ、LHR、cdc2和cyclin B基因隨著DHP誘導時間的延長，表達量顯著增加。20β-HSD

4、基因在整個DHP誘導過程中表達量都很低，IGFBP2基因表達量則隨著誘導時間的延長表現為先增加后減少。2）在不同濃度DES誘導卵母細胞最終成熟過程中，0.1μmol/L DES除對cdc2和cyclin B基因表達無促進作用，對其它幾個基因都有促進作用。1μmol/L DES顯著誘導cyp19、LHR、mPRγ、cdc2、cyclin B和IGFBP2基因的表達。2μmol/L DES可促進mPRγ、LHR、cyp19和IGFBP2的表

5、達。3）在不同濃度DEHP誘導卵母細胞最終成熟過程中，先加不同濃度DEHP，4h后加DHP培養(yǎng)時，DEHP單獨作用對所有基因都有抑制作用，DEHP濃度越高，該抑制作用越強，而在4h加入DHP后，這種抑制作用被減弱，轉而由DHP作為主導；DEHP和DHP共同存在時，DEHP對這些基因的抑制作用會相對減弱。
　　4.論文分析了DHP、DES和DEHP影響鯉魚卵母細胞最終成熟過程中一些基因的共表達關系。發(fā)現20β-HSD、mPRγ和LH