交感神經(jīng)源性組胺對(duì)兔耳血管舒縮功能的影響.pdf

1、我們前期發(fā)現(xiàn)，組胺在小鼠、豚鼠、犬、猴等多種動(dòng)物的交感神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)廣泛分布；刺激交感神經(jīng)末梢能夠使組胺（HA）和去甲腎上腺素（NE）共同從交感神經(jīng)釋放。這些結(jié)果強(qiáng)烈提示，組胺可能是一種與NE共存的交感神經(jīng)遞質(zhì)。
　　機(jī)體的大部分血管主要受交感神經(jīng)支配，既然組胺在交感神經(jīng)內(nèi)存在并能從其神經(jīng)末梢釋放，交感組胺在血管上是否可以介導(dǎo)一定的突觸前及突觸后效應(yīng)呢？為了回答這一問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)采用離體兔耳恒壓灌流模型，觀察不同的組胺受體拮抗劑對(duì)電刺激

2、引起的血管收縮的影響；并建立了優(yōu)化的高效液相色譜電化學(xué)方法檢測(cè)灌流液中的HA和NE，以確證交感組胺的釋放。實(shí)驗(yàn)的目的是初步探討交感組胺對(duì)血管舒縮功能的影響，并進(jìn)一步證明交感組胺的遞質(zhì)特性。
　　1、高效液相色譜電化學(xué)法同時(shí)測(cè)定組胺和去甲腎上腺素的方法優(yōu)化
　　為同時(shí)檢測(cè)組胺和去甲腎上腺素的釋放含量，我們對(duì)已有的高效液相色譜電化學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行了改進(jìn)，不但克服了原方法步驟繁瑣、操作不便等不足，還提高了檢測(cè)靈敏度。本方法以鄰苯二甲

3、醛（OPA）和2-巰基乙醇（2-ME）按適當(dāng)比例配制的混合溶液作為衍生試劑，對(duì)HA和NE進(jìn)行柱前衍生，并分別以3-甲基-組胺（3-M-His）和3,4-二羥基芐胺（DHBA）作為HA和NE的內(nèi)標(biāo)。同時(shí)考察了衍生條件如衍生反應(yīng)pH值、衍生試劑中2-ME的含量、衍生反應(yīng)時(shí)間，以及色譜條件如檢測(cè)電位等對(duì)目標(biāo)峰響應(yīng)值的影響。測(cè)定組胺的工作曲線回歸方程為Y=0.868X-0.1233，3-M-His為100ng/ml，相關(guān)系數(shù)γ=0.9992，線

4、性范圍為0.25～10ng/ml。測(cè)定去甲腎上腺素的工作曲線回歸方程為Y=0.0832X-0.1601，DHBA為500ng/ml，相關(guān)系數(shù)γ=0.9995，線性范圍為2.5～100ng/ml。HA和NE的檢出限分別為0.125ng/ml和1.25ng/ml。本法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高。
　　2、交感神經(jīng)源性組胺釋放對(duì)電刺激條件下兔耳血管舒縮功能的影響
　　使用離體灌流的完整兔耳，研究不同頻率的交感神經(jīng)刺激引起的組胺釋放對(duì)血管舒

5、縮功能的影響。對(duì)耳后神經(jīng)分別給予10Hz、20Hz和40Hz的電刺激，并在恒壓灌流條件下，觀察不同的組胺受體拮抗劑對(duì)灌流液流速的影響。灌流液的流速在一定程度上可反映血管的舒縮狀態(tài)。結(jié)果顯示：三種刺激頻率均能引起恒壓灌流兔耳的流出液流速下降；H1受體拮抗劑氯苯那敏能夠部分拮抗20Hz及40Hz電刺激引起的流速降低效應(yīng)（P﹤0.05）；應(yīng)用肥大細(xì)胞脫顆粒劑化合物48/80耗竭肥大細(xì)胞中的組胺后，H1受體拮抗劑仍能抑制電刺激引起的流速降低。相

6、反，H2受體拮抗劑西咪替丁能增強(qiáng)電刺激引起的流速降低效應(yīng)，且只針對(duì)更高的刺激頻率（40Hz，P﹤0.05）。此外，在H3受體拮抗劑噻普酰胺的作用下，三種頻率的電刺激所引起的血管收縮都更為顯著（P﹤0.05）。預(yù)先耗竭肥大細(xì)胞來(lái)源的組胺，仍能檢測(cè)到電刺激引起的組胺釋放，且其與NE為共同釋放。10Hz時(shí)檢測(cè)到的組胺為0.52±0.71pmol/ml，20Hz為3.23±0.94pmol/ml，40Hz時(shí)為4.76±1.17pmol/ml，隨

7、著刺激頻率的增加組胺的釋放量也有所增加（P﹤0.01,20Hz vs 10Hz;P﹤0.05,40Hz vs 20Hz）。結(jié)果提示，實(shí)驗(yàn)中的電刺激能夠引起組胺釋放，這種釋放來(lái)自于交感神經(jīng)而非肥大細(xì)胞，組胺的釋放量有一定的頻率依賴性。不同條件下，通過(guò)激動(dòng)不同的組胺受體，交感組胺能分別介導(dǎo)突觸前調(diào)節(jié)、突觸后血管收縮或舒張效應(yīng)。
　　結(jié)論：
　?。?）組胺能夠從支配兔耳血管的交感神經(jīng)末梢釋放；
　?。?）交感神經(jīng)來(lái)源的組胺能