黃芩苷抗腫瘤作用分子機制的實驗研究.pdf

1、1.黃芩苷對S180荷瘤小鼠抑瘤作用機制的研究
　　目的：探討黃芩苷對S180荷瘤小鼠的抑瘤作用機制。
　　方法：取60只小鼠復制S180荷瘤模型，隨機分成5組：黃芩苷大、中、小劑量組，對照組，環(huán)磷酰胺組。觀察黃芩苷對S180荷瘤小鼠的抑制率、脾指數(shù)及胸腺指數(shù)，NK（natural killer，NK）細胞活性及血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis facter-α，TNF-α)、白介素-2（interleuk

2、in-2，IL-2）的含量，腫瘤組織血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達。
　　結果：各種劑量的黃芩苷對小鼠S180肉瘤均有明顯的抑制效應，且呈現(xiàn)劑量依賴性，大、中、小劑量組小鼠抑瘤率分別為56.0％、48.0％、36.0％，與對照組比較均有顯著性差異（P<0.05）。此外，與對照組比較，黃芩苷大、中劑量組的脾指數(shù)有顯著性差異（P<0.05）；大、中、小劑量組的胸

3、腺指數(shù)、NK細胞活性、血清TNF-α、IL-2含量均有顯著性差異（P<0.05）。Western blot結果表明，VEGF在黃芩苷大、中、小劑量組小鼠瘤組織中的表達與對照組比較，有顯著性差異（P<0.05）。
　　結論：黃芩苷能夠抑制S180荷瘤小鼠腫瘤生長；并能明顯升高S180荷瘤小鼠脾細胞NK細胞活性及血清TNF-α、IL-2的含量，對小鼠的免疫功能有調節(jié)作用；同時黃芩苷可以下調S180荷瘤小鼠腫瘤組織VEGF的表達。

4、>　　2.黃芩苷對HepG-2細胞誘導凋亡作用的研究
　　目的：研究黃芩苷體外對HepG-2細胞抑制增殖、誘導凋亡的作用，并初步探討其作用機制。
　　方法：采用體外細胞培養(yǎng)方法，應用MTT法檢測黃芩苷對HepG-2細胞的抗增殖作用及細胞毒活性；通過倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡（scannin electron microscope，SEM）觀察凋亡細胞的形態(tài)學及超微結構的改變；應用流式細胞術（flow cytometry，

5、FCM）分析細胞周期和凋亡率，觀察黃芩苷對HepG-2細胞的誘導凋亡作用；通過免疫細胞化學(S-P法)檢測凋亡相關基因bcl-2、bax、p53蛋白表達的改變；采用Westernblot技術檢測Caspase-3蛋白表達情況，初步探討黃芩苷在體外對HepG-2細胞誘導凋亡作用的可能機制。
　　結果：(1) MTT比色法結果表明，黃芩苷在體外對HepG-2細胞有明顯的抑制作用，且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度和時間依賴性。(2)形態(tài)學觀察：倒

6、置顯微鏡、掃描電鏡及HE染色結果表明，黃芩苷作用于腫瘤細胞后，可誘導較典型的細胞凋亡形態(tài)學變化及超微結構改變，如細胞胞體縮小，胞質濃縮，微絨毛結構減少甚至消失，胞核向外呈銳角突起，染色質高度濃縮，電子密度增高，邊集于核膜下或呈新月形，有的出現(xiàn)核固縮，核碎裂以及凋亡小體形成等。（3）免疫細胞化學(S-P法)檢測凋亡相關基因bcl-2、p53蛋白表達明顯減少、bax表達明顯增加；Bcl-2/Bax比例明顯降低。(4)流式細胞儀分析結果，50

7、μg/ml黃芩苷作用于HepG-2細胞48 h后，出現(xiàn)明顯的細胞凋亡峰，其凋亡率為27.01%，與對照組細胞的凋亡率5.47%相比差異有顯著性（P＜0.01）。且G2/M期細胞明顯減少，而S期細胞比率顯著上升，多數(shù)細胞阻滯在S期。（5）Western blot結果顯示，隨著藥物濃度的增加Caspase-3酶原蛋白條帶逐漸變細，并且可見到蛋白裂解產(chǎn)物（Caspase-3蛋白）逐漸增多。
　　結論：黃芩苷對 HepG-2細胞具有較強的