茶多酚對(duì)鼠胎兒成纖維細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、細(xì)胞凋亡（Apoptosis）是生物體內(nèi)自發(fā)發(fā)生的細(xì)胞生理性的死亡，細(xì)胞正常凋亡對(duì)維持生物體正常生長(zhǎng)發(fā)育和維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的作用，細(xì)胞異常凋亡能夠引發(fā)疾病，如癌癥和腫瘤等。有報(bào)道指出在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中添加抗氧化劑能夠抑制細(xì)胞凋亡，茶多酚（Tea polyphenols,TP）是一種天然抗氧化劑，具有多種生物學(xué)功能，抗氧化能力比其他抗氧化劑抗氧化能力強(qiáng)很多倍，對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞主要用于癌細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的研究，且對(duì)抑制癌細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)作

2、用效果顯著，研究表明，TP具有抗癌和抗腫瘤的作用，但是在體細(xì)胞培養(yǎng)液中添加TP對(duì)體外培養(yǎng)鼠胎兒成纖維細(xì)胞凋亡效果的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　【目的】：本試驗(yàn)主要通過(guò)體外培養(yǎng)MEF細(xì)胞，用不同濃度的TP培養(yǎng)液處理細(xì)胞，研究不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液對(duì)鼠胎兒成纖維細(xì)胞存活率和細(xì)胞形態(tài)變化的影響，并應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄方法檢測(cè)抗凋亡基因Bcl-2基因、促凋亡Bax基因和促凋亡基因Casase-3從分子水平上檢測(cè)基因表達(dá)量的變化，用來(lái)確定天然抗氧化劑茶多酚

3、對(duì)鼠胎兒成纖維細(xì)胞凋亡效果的影響。
　　【方法】：1.取妊娠12.5天昆明白母鼠，熱消化法分離原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，差速貼壁法純化細(xì)胞，傳至第3代，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，檢測(cè)細(xì)胞活力。
　　2.用含有不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，分別培養(yǎng)24h、36h、72h、96h，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，用MTT法進(jìn)行細(xì)胞存活率的檢測(cè)，比較添加不同濃度茶多酚培養(yǎng)液對(duì)細(xì)胞存活率的影響。
　　3.用不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液處理細(xì)胞，培養(yǎng)72h

4、，分別提取細(xì)胞總RNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，反轉(zhuǎn)錄合成目的基因Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因，瓊脂糖凝膠電泳對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，使用軟件進(jìn)行條帶灰度值的檢測(cè)，比較基因的相對(duì)表達(dá)量。
　　【結(jié)論】：通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線確定了3代細(xì)胞適合試驗(yàn)用，不同濃度的茶多酚培養(yǎng)液處理細(xì)胞后對(duì)鼠胎兒成纖維細(xì)胞生存率和形態(tài)的影響為：當(dāng)茶多酚濃度低于100 mg/L時(shí)，MTT結(jié)果為72h時(shí)，對(duì)細(xì)胞促進(jìn)作用最明顯，96h時(shí)，細(xì)胞生存率低

5、于72h時(shí)，可能是細(xì)胞正常生長(zhǎng)的結(jié)果。對(duì)鼠胎兒成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，并且細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有發(fā)生明顯的變化，通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)濃度為40 mg/mL時(shí)促進(jìn)作用略微明顯，高于細(xì)胞對(duì)照組，但是沒(méi)有顯著差異，當(dāng)細(xì)胞濃度高于100 mg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，從形態(tài)學(xué)觀察出細(xì)胞出現(xiàn)調(diào)亡現(xiàn)象。通過(guò)反轉(zhuǎn)錄結(jié)果表明在Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子途徑上沒(méi)有什么影響,因此，TP各個(gè)濃度處理組中基因相對(duì)表達(dá)量沒(méi)有顯著性差異