當歸紅芪超濾膜提取物對過氧化氫誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞氧化損傷的影響.pdf

1、目的：建立人臍靜脈內(nèi)皮細胞氧化損傷模型，研究當歸紅芪超濾膜提取物對H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV-304氧化損傷的影響，并初步探討其作用機制。 方法：通過酶消化法對離體的人臍靜脈內(nèi)皮細胞系ECV-304細胞進行消化傳代，建立過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的ECV-304細胞氧化損傷模型。采用超濾技術(shù)對當歸紅芪合劑進行分離與純化，以不同分子量、不同濃度的當歸紅芪超濾膜提取物作用于氧化損傷的ECV-304細胞，采用MTT法測定ECV-

2、304細胞的活性及存活率，黃嘌呤氧化酶法檢測細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活力，硫代巴比妥酸(TBA)法檢測細胞內(nèi)丙二醛(MDA)活力，考馬斯亮蘭法檢測細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的含量，流式細胞儀分析細胞周期及檢測細胞內(nèi)Ca2+含量，RT.PCR檢測細胞內(nèi)AT1 mRNA的表達，觀察當歸紅芪超濾膜提取物對H2O2誘導(dǎo)ECV-304細胞氧化損傷的影響。 結(jié)果：經(jīng)0.5mmol/LH2O2刺激后細胞活性明顯降低，SOD活力明顯降低，MDA活力明顯

3、提高，G0/G1期細胞的數(shù)目明顯增加，S期細胞的數(shù)目明顯減少，細胞內(nèi)Ca2+含量明顯增加(P<0.01)，AT1mRNA表達增加(p<0.05)；與H2O2組相比，當歸紅芪超濾膜提取物可以增強H2O2誘導(dǎo)ECV-304細胞氧化損傷的細胞活性，增加細胞的存活率且以作用72h為佳，提高氧化損傷的ECV-304細胞的SOD活力，降低氧化損傷的ECV-304細胞的MDA活力，促進氧化損傷的ECV-304細胞向S期轉(zhuǎn)變，減少氧化損傷的ECV-30

4、4.細胞內(nèi)Ca2+含量，減少細胞內(nèi)ATlmRNA表達(p<0.01，p<0.05)，且以5萬分子量以下為佳。 結(jié)論：H2O2對離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株ECV-304細胞有明顯地致氧化損傷作用；當歸紅芪超濾膜提取物可有效抑制H2O2誘導(dǎo)的ECV-304細胞的氧化損傷，保護血管內(nèi)皮細胞，且以5萬分子量以下、高濃度、72h為佳；當歸紅芪超濾膜提取物對氧化損傷血管內(nèi)皮細胞的保護作用可能與其提高了抗氧化酶活性，降低了脂質(zhì)過氧化物活性，