黑大蒜提取物對小鼠過敏性哮喘模型的治療作用.pdf

1、前言:
　　 氣管哮喘是嚴重威脅人類健康的慢性呼吸系統(tǒng)疾病,全球約有3億患者。哮喘的發(fā)病機制非常復雜,至今尚未完全闡明。近年來,隨著分子生物學、遺傳學、免疫學、細胞生物等技術的廣泛應用,對哮喘發(fā)病機制的研究已經(jīng)取得很大進展。認為其發(fā)生機制是Th1/Th2細胞系統(tǒng)功能失衡和Th2細胞優(yōu)勢分化,有利于Th2型細胞因子如IL-4的產(chǎn)生,誘導了IgE類抗體產(chǎn)生水平升高,肥大細胞、嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞參與,表現(xiàn)以支氣管平滑肌收縮為主

2、的過敏反應性癥狀。大蒜(garlic)為百合科蔥屬植物,性溫味辣,具有抗菌、消炎、祛風、止痢、散癰消毒等功效。目前研究較多并且可以人工提取的有效成分是大蒜素(Allicin)。近年來日本學者發(fā)現(xiàn)在控制濕度和溫度的情況下,普通的鮮(白)大蒜經(jīng)過一定處理可由白色變成黑色(稱為黑大蒜)。Sasaki等和本實驗室的研究已證明黑大蒜較鮮大蒜含有更多的S-烯丙基-L-半胱氨酸,對Th1型免疫應答功能有促進作用。為此,本實驗通過建立小鼠哮喘模型,觀察

3、其經(jīng)黑大蒜提取物處理后,小鼠體內(nèi)細胞因子IFN-γ、IL-4和IL-33、特異性抗體IgE及嗜酸性粒細胞含量的變化等情況,為證實黑大蒜提取物能夠抑制哮喘的形成及其作用的相關機制提供理論及實驗依據(jù)。
　　 實驗方法:
　　 1、實驗動物及主要試劑BALB/c小鼠。
　　 雞卵蛋白(OVA),氫氧化鋁,富馬酸酮替芬片,鮮大蒜和黑大蒜提取物,細胞因子IFN-γIL-4和IL-33檢測川ELISA試劑盒,IgE檢測試劑盒

4、,PBS溶液,Hinkelmann稀釋液。
　　 2、實驗動物分組及處理
　　 實驗小鼠隨機分為5組,即空白組、陰性組、藥物組,鮮大蒜組和黑大蒜組。各組小鼠(空白組以PBS代替)均分別于第0、7、14天腹腔注射毀敏液。第21-23天誘發(fā)哮喘,每天誘發(fā)一次。其中藥物組,鮮大蒜組和黑大蒜組均于每次誘發(fā)后分別立即給予腹腔注射富馬酸酮替酚溶液,鮮大蒜提取物溶液和黑大蒜提取物溶液進行治療。陰性組于每次激發(fā)后腹腔注射PBS?？瞻捉M用

5、:PBS替代誘發(fā)液進行同樣霧化吸入,然后腹腔注射PBS。
　　 3、樣品的采集與指標檢測
　　 (1)小鼠血清中細胞因子IFN-γ、IL-4和IL-33的檢測末次處理后眼球取血,離心收集血清。采用ELISA法檢測血清中IFN-γ、IL-4和IL-33的水平。
　　 (2)小鼠血清中IgE的檢測末次處理后眼球取血,離心收集血清。采用ELISA法檢測血清中IgE的水平。
　　 (3)小鼠全血中嗜酸性粒細胞的檢

6、測末次處理后眼球取血,采用直接計數(shù)法檢測全血中嗜酸性粒細胞的水平。
　　 (4)統(tǒng)計學處理采用SPSS軟件對實驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析,計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,單因素方差分析顯示組間差異有統(tǒng)計學意義后,進一步以q檢驗進行組間兩兩比較,P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 實驗結果:
　　 1、黑大蒜提取物對實驗小鼠血清中細胞因子IFN-γ、IL-4和IL-33的影響
　　 各組小鼠經(jīng)處理

7、后,小鼠血清細胞因子水平結果為:①IFN-γ:陰性組水平顯著低于空白組水平,(P＜0.001),黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯高于陰性組水平(P＜0.001),且黑大蒜組水平明顯高于鮮大蒜組水平(P＜0.001)。但均末完全恢復到空白組和藥物組水平。②IL-4:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001)。黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(P＜0.001),且黑大蒜組水平明顯低于鮮大蒜組水平(P＜0.05)。黑大蒜組已基本恢復

8、劍空白組水平。黑大蒜組和鮮大蒜組水平與藥物組水平顯示幾乎同樣的結果。③IL-33:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001)。黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(P＜0.01);黑大蒜組水平低于鮮大蒜組水平,但二者之間未見無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。黑大蒜組對IL-33產(chǎn)生的抑制作用不及藥物組(P＜0.05)。
　　 2、黑大蒜提取物對小鼠血清中IgE的影響
　　 各組小鼠經(jīng)處理后,小鼠血清中IgE水平的檢

9、測結果為:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001),黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(P＜0.001),且黑大蒜組水平更明顯低于鮮大蒜組水平(P＜0.05)。黑大蒜組抑制IgE產(chǎn)生可達藥物組水平。
　　 3、黑大蒜提取物對小鼠全血中嗜酸性粒細胞的影響
　　 各組小鼠經(jīng)處理后,小鼠血清中嗜酸性粒細胞水平的檢測結果為:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001),黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(

10、P＜0.001),且黑大蒜組水平更低于鮮大蒜組水平(P＜0.05),但未能降低到藥物組水平(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1、黑大蒜提取物能夠使哮喘模型小鼠體內(nèi)TH1型細胞因子產(chǎn)生水平升高,Th2型細胞因子水平降低,糾正Th1/Th2型免疫應答失衡。
　　 2、黑大蒜提取物能夠使特異性IgE類抗體產(chǎn)生減少,減輕哮喘癥狀。
　　 3、黑大蒜提取物可以下調(diào)哮喘模型小鼠全血中嗜酸性粒細胞水平,從而遏制小