早產對大鼠視網膜發(fā)育及氧誘導視網膜病變的影響.pdf

1、研究背景：
　　早產是一種常見的臨床現(xiàn)象,導致新生兒較高的死亡率和發(fā)病率。臨床證據(jù)表明,早產兒發(fā)生視覺損害和眼部疾病的風險明顯高于足月兒。早產可影響視網膜血管系統(tǒng)的結構和功能發(fā)育,從而使得早產兒罹患血管性疾病的閾值降低,臨床上最為常見的表現(xiàn)是早產兒視網膜病變(ROP)。ROP是一種復雜的視網膜新生血管性疾病,因早產兒的血管發(fā)育異常所致。視網膜血管化越不成熟,發(fā)生嚴重ROP的風險就越大。小胎齡和低出生體重是公認的發(fā)生ROP的最重要的

2、危險因素。但是,作為一種多因素致病性疾病,ROP的病因和病理機制目前尚未闡明。
　　大鼠氧誘導視網膜病變(OIR)模型廣泛用于 ROP的實驗研究中,其應用基礎為新生大鼠發(fā)育不成熟的視網膜血管系統(tǒng)與人類早產兒極其相似。然而,OIR采用的是足日齡生產的正常新生大鼠,它們出生時和出生后的病理生理狀態(tài)與早產兒有所不同。在新生大鼠中模擬早產兒出生后生長受限的研究發(fā)現(xiàn),出生后的生長發(fā)育情況決定了幼鼠正常視網膜血管化的速度和OIR中異常血管化的

3、程度。理論上,早產大鼠可在一定程度上模擬人類早產兒出生時的不成熟以及出生后的發(fā)育不良經歷,能為研究“早產”這一因素在ROP中的作用提供一個良好的平臺。雖然早產大鼠模型已被廣泛用于研究人類發(fā)育相關性疾病,但目前有關早產大鼠的視網膜發(fā)育特點以及早產對大鼠OIR的影響尚無報道。
　　目的：
　　1.觀察早產大鼠的神經視網膜、視網膜淺層毛細血管的結構以及視網膜功能的發(fā)育特點;
　　2.觀察早產大鼠在氧誘導條件下的視網膜血管病變

4、情況及視網膜中血管內皮生長因子(VEGF)和胰島素樣生長因子1(IGF-1)的表達水平。
　　方法
　　1.于Sprague Dawley(SD)大鼠孕19天時行剖宮產,建立早產大鼠模型,觀察空氣中飼養(yǎng)的早產幼鼠的一般情況及體重變化。同時設正常足日齡生產的大鼠作為對照。
　　2.分別于幼鼠出生后4、7、10、14天行視網膜切片、HE染色及熒光標記的isolectin B4視網膜血管染色、鋪片,觀察幼鼠視網膜各層細胞和淺

5、層血管形態(tài),測量神經視網膜各層厚度和未血管化區(qū)面積;分別于幼鼠出生后14、21、28、35天行視網膜電圖(ERG)檢測,記錄各波的波幅和潛伏期。
　　3.將新生大鼠在出生后6h內置于80％/21%濃度、24h交替的動物氧箱中,維持2周,于出生后15天返回空氣中飼養(yǎng),建立大鼠OIR模型;分別于出生后14、18、22天行熒光標記的isolectin B4視網膜血管染色、鋪片,觀察視網膜血管形態(tài),測量視網膜無血管區(qū)及新生血管區(qū)面積;采用

6、反轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)檢測視網膜中VEGF、IGF-1 mRNA的表達水平;于出生后18天行視網膜切片、HE染色,計數(shù)突破視網膜內界膜的血管內皮細胞數(shù)量。
　　結果：
　　1.剖宮產手術的成功率以及早產幼鼠的存活率較高。出生后3周內,早產幼鼠的體重低于足日齡幼鼠(P<0.001)。
　　2.早產幼鼠的視網膜各層細胞和淺層血管形態(tài)及發(fā)育趨勢與對照組相似;出生后早期,早產幼鼠的視網膜厚度大于對照組(P<0.0

7、5),2周時趨于一致;2周內早產幼鼠的視網膜無血管區(qū)明顯大于對照組(P<0.001),2周時兩組的視網膜血管化均已完成;出生2周后,早產鼠的ERG波幅和潛伏期與對照組相似。
　　3.波動氧干預后,早產幼鼠的視網膜一級血管迂曲程度與對照組相似;早產幼鼠14和18天的視網膜無血管區(qū)及18天的視網膜新生血管區(qū)面積大于對照組(P<0.001),早產幼鼠22天時殘留的視網膜血管病變較對照組更多(P<0.01)。早產幼鼠14、18、22天的視