HPV18 E6基因特異性沉默對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:探討化學(xué)合成siRNA沉默HPV18 E6基因?qū)θ藢m頸癌細(xì)胞系HeLa細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法:化學(xué)合成兩條靶向HPV18 E6的siRNA序列，用脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，同時(shí)設(shè)立脂質(zhì)體細(xì)胞對(duì)照。半定量RT-PCR檢測(cè)HPV18E6基因沉默對(duì)E6基因自身及宮頸癌特異性人半翼基因(human wings apart-like，hWAPL)轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響。四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞增殖活性。細(xì)胞免疫化學(xué)技

2、術(shù)檢測(cè)p53蛋白表達(dá)水平的變化。流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期變化及細(xì)胞凋亡。透射電鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果:MTT檢測(cè)結(jié)果顯示20nM、50nM和80nM終濃度轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖活性均有下降，以50nM濃度轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞活性下降最為顯著。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，各時(shí)間點(diǎn)E6和hWAPL基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平與細(xì)胞對(duì)照組比較均有降低，以48h時(shí)降低最為明顯。細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后p53蛋白表達(dá)水平增高。流式細(xì)胞分析顯示轉(zhuǎn)