中國(guó)造血干細(xì)胞損獻(xiàn)者資料庫四川分庫中四川籍漢族人群HLA-B-15等位基因水平多態(tài)性研究及新等位基因HLA-B-9512的鑒定研究.pdf

1、第一部分 目的:鑒定中國(guó)人群中一例HLA-B新等位基因. 方法:樣本DNA抽提采用G&T抽提試劑盒，采用PCR-SSP方法進(jìn)行中低分辨分型，并應(yīng)用基因克隆和DNA測(cè)序技術(shù)對(duì)先證者HLA-B基因的外顯子2和3進(jìn)行序列分析，與已知等位基因序列進(jìn)行比對(duì)。先證者爺爺?shù)难鍖W(xué)分型采用標(biāo)準(zhǔn)的微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)方法，家系調(diào)查采集了先證者的父母、以及先證者的爺爺和奶奶的血樣。 結(jié)果:PCR-SSP分型根據(jù)試劑格局無法判定結(jié)果，經(jīng)

2、克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)該等位基因和B<'*>1502序列的差異只是在外顯子3區(qū)域中360位G->C，導(dǎo)致相應(yīng)的密碼子120由谷氨酰胺變?yōu)榻M氨酸。血清學(xué)分型結(jié)果表明新等位基因血清學(xué)特異性為B15寬特異性。家系研究顯示先證者帶有的B<'*>9512等位基因系來自其爺爺，并經(jīng)過三代遺傳。攜帶該等位基因的HLA單倍型為A<'*>11，B<'*>9512，DRB1<'*>14。在大約20000名隨機(jī)捐獻(xiàn)者的檢測(cè)中，未發(fā)現(xiàn)其他帶有B'9512基因的個(gè)體，據(jù)此

3、估計(jì)B<'*>9512在四川地區(qū)人群中的基因頻率小于0.0001。 結(jié)論:該等位基因?yàn)镠LA新等位基因，2006年2月世界衛(wèi)生組織HLA因子命名委員會(huì)正式將其命名為HLA-B*9512。 第二部分 目的:采用聚合酶鏈反應(yīng)一序列分析基礎(chǔ)上的HLA分型(polymerasechain reaction-sequence based typing，PCR-SBT)方法，研究中國(guó)造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫(CMDP)四川分庫

4、中四川籍漢族人群HLA-B<'*>15組等位基因的分布特點(diǎn)，初步探討四川籍移植供患者對(duì)中可能存在的HLA-B<'*>15等位基因水平上的錯(cuò)配模式及其在臨床非血緣造血干細(xì)胞移植供者選擇中的作用。 方法:從中國(guó)造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫四川分庫中四川籍漢族人群中/低分辨分型HLA-B<'*>15陽性樣本中按不同血清學(xué)特異性分層抽取105例樣本，應(yīng)用PCR-SBT技術(shù)進(jìn)行測(cè)序分型，獲得四川籍漢族人群HLA-B<'*>15組高分辨分型結(jié)果。

5、應(yīng)用方根法計(jì)算HLA-B<'*>15各等位基因頻率并采用最大似然法計(jì)算兩座位和三座位單倍型頻率。同時(shí)與其他人群資料進(jìn)行比較，并進(jìn)一步探討中國(guó)四川籍患者在中國(guó)造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫中尋找供者時(shí)可能存在的HLA-B<'*>15等位基因水平上的錯(cuò)配模式。 結(jié)果:(1)共檢測(cè)到16種已知HLA-B<'*>15等位基因和1例未知等位基因。本研究中檢出的16種等位基因有：B<'*>15010101(B62)，B<'*>1502(B75)，B

6、<'*>1503(B72)，B<'*>1505(B62)，B<'*>1507(B62)，B<'*>151101(B75)，B<'*>1512(B76)，B<'*>1513(B77)，B<'*>1517(B63)，B<'*>1518(B71)，B<'*>1525(B62)，B<'*>1527(B62)，B<'*>1529(B15)，B<'*>1532(B62)，B<'*>1546(B72)，B<'*>1558(B62)。其中以B<'*>1

7、502(36.8％)最常見，其次為B<'*>15010101(21.1％)，B<'*>151101(9.1％)，B<'*>1518(7.O％)，B<'*>1525(6.1％)，這五種等位基因占B<'*>15等位基因家族的85％。在B<'*>15等位基因家族中，表達(dá)B75抗原的等位基因HLA-B<'*>1502和B<'*>151101共占46.5％，但表達(dá)B62抗原的HLA-B<'*>15等位基因多態(tài)性最強(qiáng)，共檢出7種等位基因。此外，本研

8、究發(fā)現(xiàn)1例未知等位基因，該基因序列與所有已知的HLA-B<'*>15或B<'*>46等位基因序列均不相同，在外顯子3的116位處存在一個(gè)點(diǎn)突變G->A。(2)分別檢出A-B<'*>15、B<'*>15-DRBl兩座位單倍型28種和40種。檢出A-B<'*>15-DRBl三座位單倍型52種，最常見的五個(gè)三座位單倍型為： A<'*>11-B<'*>1502-DRB 1<'*>12(1.21％)，A<'*>11-B<'*>1 502-DRB

9、1<'*>15(0.77％)，A<'*>11-B<'*>15010101-DRB 1<'*>04(0.77％)，A<'*>02-B<'*>1502-DRB1<'*>12(0.32％)，A<'*>02-B<'*>151101-DRB1<'*>09(0.31％)。 結(jié)論:研究表明在四川籍漢族人群中HLA-B<'*>15等位基因水平表現(xiàn)出豐富的多態(tài)性和特有的分布特征，這提示對(duì)B<'*>15陽性患者進(jìn)行造血干細(xì)胞無關(guān)供者尋找時(shí)，需要進(jìn)行