冠心病患者紅細胞CR1與免疫復合物結合效率的初探.pdf

1、背景：
　　補體受體1（complement receptor type1，CR1）是一種表達于多種細胞膜上的多態(tài)性單鏈跨膜糖蛋白，是補體 C3b、iC3b和C4b片段的受體。紅細胞膜上 CR1主要的生理功能是參與清除外周循環(huán)中的免疫復合物（immune complexes,IC）。一系列研究發(fā)現(xiàn)，紅細胞膜上CR1的表達量、CR1與IC的結合效率下降，導致免疫復合物的沉積，加重了系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic Lupus Ery

2、thematosus，SLE）、類風濕性關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）等自身免疫病的病變程度?；诙嗄陝用}粥樣硬化（atherosclerosis，AS）與自身免疫關系方面的研究成果，AS可能是一種的自身免疫病這一觀點得到學者們的廣泛認同，已經在冠心?。╟oronary heart disease，CHD）患者及 AS實驗動物血漿中發(fā)現(xiàn)多種高濃度自身抗體[如抗熱休克蛋白自身抗體、抗氧化修飾低密度脂蛋白自身抗體（

3、anti-oxidized low density lipoprotein immunoglobulin G,anti-ox-LDL IgG）等]，其中anti-ox-LDL IgG與AS形成關系的研究最多。AS作為一種可能的自身免疫病，可能出現(xiàn)類似于其他自身免疫病紅細胞膜上CR1的表達量、CR1與IC的結合效率下降，導致IC的沉積，最終加速病變進展。目前國內外關于CR1與AS關系的研究較少，2009年Boiocchi C等研究發(fā)現(xiàn)CH

4、D患者組與健康人組CR1基因型頻率無顯著性差異。
　　研究目的：
　　通過采集胸痛（chest pain，CP）患者及健康人群外周血細胞、血漿，利用流式細胞術（flow cytometry，F(xiàn)CM）、免疫沉淀法（immunoprecipitation，IP）、酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）、熒光顯微鏡等技術，分析外周血紅細胞CR1表達量、CR1與IC結合效

5、率、紅細胞上丙二醛修飾的低密度脂蛋白（malondialdehyde oxidized low density lipoprotein，MDA-LDL）表達量（用于間接反映紅細胞上結合的MDA-LDL免疫復合物）、血漿中低密度脂蛋白-低密度脂蛋白抗體免疫復合物（low density lipoprotein immune complexes，LDL-IC）濃度、血漿中補體 C3（complement3，C3）濃度等，初步探討參與外周循環(huán)

6、IC清除途徑的幾個重要成分在CHD患者中是否存在異常改變，導致與AS相關IC未能得到有效清除，最終加速AS的進展。
　　研究內容和方法：
　　一、病例、健康人群選擇及分組
　　病例選擇2011-9月～2012年2月我院心血管內科住院患者共46例，平均年齡65±11歲。全部患者均行冠脈造影（coronary angiography，CAG）檢查，參照診斷標準將胸痛（chest pain，CP）患者分為：正常冠脈患者組（n

7、ormal coronary arteries，NCA）、穩(wěn)定型心絞痛組（stable angina，SA）、不穩(wěn)定型心絞痛組（unstable angina，UA）、急性心肌梗死組（acute myocardial infraction，AMI）。健康人群組（normal subjects，NS）選擇2011-9月～2012年2月到我院體檢人群共15例，平均年齡為21±3。各組在性別構成比上無統(tǒng)計學差異。所有研究對象均排除糖尿病、甲狀

8、腺功能亢進、甲狀腺功能減低等內分泌代謝疾病、感染、惡性腫瘤、腦卒中、肝腎功能不全、創(chuàng)傷、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、服用免疫抑制劑者。在實驗前，完成對所有受試對象進行記錄臨床資料，并評價受試對象冠心病危險因素。
　　二、外周血紅細胞CR1表達、CR1與IC結合效率、紅細胞上MDA-LDL表達、血漿LDL-IC濃度、C3濃度等檢測
　　對符合試驗入選標準的受試對象采集靜脈血標本（采集于 EDTA抗凝管中），立即送到我院檢驗科

9、進行血常規(guī)分析，根據血常規(guī)結果取部分抗凝全血稀釋成3×105個紅細胞/100ul，立即利用流式細胞術檢測紅細胞CR1表達量、CR1與IC結合效率、紅細胞上 MDA-LDL表達；其余標本進行分離血漿，部分血漿立即送我院檢驗科利用特種蛋白分析儀檢測C3濃度，其余血漿保存于-80℃冰箱，在一月之內，利用ELISA檢測血漿中LDL-IC。
　　三、紅細胞CR1表達量、CR1-IC結合效率與血漿中LDL-IC濃度的關系的初步探討
　　

10、對紅細胞CR1表達量、CR1-IC結合效率與血漿中LDL-IC濃度作相關分析。
　　研究結果：
　　一、各組受試對象冠心病危險因素的評價
　　1.1、年齡、性別：在年齡構成上，NCA組（58±9）、SA組（65±11）、UA組（71±8）、AMI組（69±12）均明顯大于NS組（21±3），P<0.05；在性別構成比上，各組間無顯著性差異，P>0.05。
　　1.2、高血壓：與NS組（0/15）相比較，NCA組(

11、9/15)、SA組(7/9)、UA組(10/15)、AMI組(2/7)均有更高的高血壓病患病率，P<0.05。
　　1.3、吸煙史：與NS組(0/15)相比較，NCA組(5/15)、SA組(4/9)、UA組(5/15)、AMI組(3/7)均有更高比例的吸煙人群，P<0.05。
　　1.4、血脂水平：在甘油三酯（triglyceride，TG）水平上,SA組（2.34±1.18）、UA組（1.89±1.38）較NS組（1.27

12、±1.37）明顯增高，各自P值均<0.05,NCA組（1.53±0.93）及AMI組（0.93±0.44）TG水平較NS組無顯著性差異，P>0.05；各組在總膽固醇（total cholesterol，TC）水平、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平均無顯

13、著性差異，P>0.05。
　　各項指標提示CP患者存一種或多種冠心病危險因素。
　　二、外周血紅細胞CR1表達、CR1與IC結合效率、紅細胞上MDA-LDL表達、血漿LDL-IC濃度、C3濃度
　　2.1、紅細胞 CR1表達量：紅細胞 CR1表達量以平均熒光強度(mean fluorescence intensity，MFI）表示，結果發(fā)現(xiàn)，NCA組MFI（9.85±2.32）、SA組MFI（9.69±1.20）、UA

14、組MFI（9.92±1.97）均較NS組MFI(12.07±1.96)降低，P<0.05；AMI組MFI(10.60±2.66)與NS組MFI無顯著性差異，P>0.05。
　　2.2、CR1與 IC結合效率：CR1與 IC結合效率以平均紅細胞上結合帶熒光標記IC（mean fluorescence intensity of binding IC on erythrocyte，MFI-IC）的熒光強度表示,結果發(fā)現(xiàn)，SA組 MFI-

15、IC（69.56±46.44）、UA組 MFI-IC（61.19±32.44）、AMI組MFI-IC（62.50±43.52）較NS組MFI-IC（112.86±63.47）降低，P<0.05；NCA組MFI-IC（83.54±45.13）與NS組MFI-IC無顯著性差異，P>0.05。
　　2.3、紅細胞上 MDA-LDL表達：紅細胞上 MDA-LDL表達以平均熒光強度（mean fluorescence intensity o

16、f binding MDA-LDL on erythrocyte，MFI-MDA）表示,分析結果顯示各組檢測管與相應的同型對照管相比較均無顯著性差異，P>0.05，提示各試驗組紅細胞上并無結合MDA-LDL或MDA-LDL免疫復合物。
　　2.4、血漿LDL-IC濃度：血漿中LDL-IC濃度以光密度（optical density，OD）值表示，結果發(fā)現(xiàn)，NCA組(0.43±0.15)、SA組（0.52±0.14）、UA組（0.5

17、0±0.23）、AMI組（0.54±0.35）OD值均與NS組（0.42±0.22）OD值無顯著性差異，P>0.05。
　　2.5、血漿C3濃度：C3濃度以各組間中位數表示，分析結果顯示，NCA組(0.97)、SA組（1.20）、UA組（1.07）、AMI組（1.10）均與NS組（1.02）血漿C3濃度無顯著性差異，P>0.05。
　　三、紅細胞CR1表達量、IC結合效率與血漿中LDL-IC濃度關系的初步探討
　　對各

18、組紅細胞CR1表達量MFI、IC結合效率MFI-IC與血漿中LDL-IC濃度OD值采用Pearson或Spearman相關分析，結果發(fā)現(xiàn)，各組MFI與OD值不存在統(tǒng)計學意義上的相關，P>0.05；各組MFI-IC與OD值同樣不存在統(tǒng)計學意義上的相關，P>0.05。
　　結論：
　　1、在CP患者中，紅細胞CR1表達量（除AMI組外）及與IC結合效率（除NCA組外）降低，可能導致與AS相關IC未能得到有效清除，最終加速AS的進