前列腺癌相關(guān)抗原基因的擴增及真核表達.pdf

1、前列腺癌是危害男性健康常見的惡性腫瘤，在美國前列腺癌的發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌，成為危害男性健康第一位的腫瘤.中國的前列腺癌發(fā)病率遠遠低于歐美國家，但近年來也呈現(xiàn)上升趨勢。本研究通過特異性擴增前列腺癌相關(guān)抗原基因，進行真核表達，為建立前列腺癌疫苗研究所需要的轉(zhuǎn)基因細胞模型及動物模型奠定了基礎(chǔ)。
　　 目的：從人前列腺癌細胞系中特異性擴增前列腺癌相關(guān)抗原基因，包括前列腺干細胞抗原(PSCA)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、前列腺特異性膜抗

2、原(PSMA)，構(gòu)建真核表達載體，進行真核表達。
　　 方法：通過RT-PCR的方法從人前列腺癌細胞系LNCaP中特異性擴增PSCA、PAP、PSMA基因，連接到真核表達載體pIRES-neo中，構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pIRES-neo-PSCA-His，pIRES-neo-PAP-His，pIRES-neo-PSMA-His.脂質(zhì)體法瞬時轉(zhuǎn)染COS-7細胞，應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測前列腺相關(guān)抗原的蛋白表達。隨后選擇質(zhì)粒pIRES-neo-

3、PSCA-His，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染小鼠黑色素瘤B16細胞，通過G418初步加壓篩選，用RT-PCR及免疫熒光和流式細胞術(shù)分別檢測B16細胞中人PSCA基因的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達。
　　 結(jié)果：特異性擴增得到大小與人PSCA、PAP、PSMA基因相符的基因片段，序列測定證實與GenBank上登錄的序列一致；成功構(gòu)建真核表達質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染COS-7細胞，證實質(zhì)?？梢哉婧吮磉_。pIRES-neo-PSCA-His質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染B16細胞并進行