蜂毒肽和神蜂精抗HSV-1病毒作用及其機理研究.pdf

1、本文考察了采用層析法分離蜂毒得到的純蜂毒肽和神蜂精(內含蜂毒肽0.05 mg/ml的中藥外搽劑)的抗HSV-1病毒作用,同時對其抗HSV-1病毒的機理進行了探索,并研究了HSV-1感染后小鼠腦細胞中p53和p21 WAF1/CIP1蛋白表達的變化。結果如下：
　　 ⑴QF-1取毒器蜂箱內取毒法采集意大利蜜蜂的蜂毒,過濾提純蜂毒后經葡聚糖凝膠G-25,G-50,G-75層析和溶血試驗分離純化后得到蜂毒肽。經SDS-PAGE電泳Ma

2、rker及蜂毒肽標準品對分離所得的組分進行鑒定,證實其為電泳級純度的蜂毒肽,利用分離所得的蜂毒肽進行后續(xù)試驗。
　　 ⑵CPE法測定并經過Reed-Meuench法計算得出HSV-1病毒的半數感染量TCID50為10-5.2/100uL,MTT法測定并和Reed-Meuench法計算得出蜂毒肽和神蜂精對Vero細胞的半數中毒劑量CC50分別為10-2.1mg/100uL和10-2.4mg/100uL。體外實驗結果表明1、3、6、

3、9倍CC50的蜂毒肽對HSV-1病毒的抑制率分別為55.12％,55.12％,59.30％,66.51％,藥物對照組(阿昔洛韋試驗組)的抑制率為74.88％。四個梯度濃度的神蜂精對HSV-1病毒的抑制率分別為69.50％,71.52％,62.11％,45.74％,阿昔洛韋試驗組的抑制率為75.34％。
　　 ⑶體內試驗結果表明蜂毒肽和神蜂精均有提高小鼠存活率和延長小鼠存活時間的作用。蜂毒肽在低、中和高劑量(1×10-3mg/mL

4、,3×10-3mg/mL,6×10-3mg/mL)時小鼠的存活率分別為40％,40％和50％。神蜂精試驗組的小鼠存活率分別為40％,50％和60％,均高于病毒對照組的20％。蜂毒肽試驗組小鼠的平均存活時間分別為11.4d,12d,12.7d,中、高劑量蜂毒肽試驗組的平均存活時間明顯高于病毒對照組(p＜0.05)。神蜂精試驗組小鼠的平均存活時間分別為11.6d,11.8d,12.8d,明顯高于病毒對照組(p＜0.05)。高劑量組的蜂毒肽和

5、神蜂精的小鼠平均存活時間均高于陽性對照組(阿昔洛韋試驗組)。
　　 ⑷蜂毒肽和神蜂精的抗HSV-1病毒機理的研究結果表明,蜂毒肽和神蜂精沒有直接殺死HSV-1病毒的作用,但是對HSV-1病毒的吸附、合成和釋放均有明顯的抑制作用。1CC50,3CC50,6CC50,9CC50的蜂毒肽對HSV-1病毒的吸附均有抑制作用,抑制率分別為31.25％,32.92％,32.92％,32.08％。四個梯度濃度1CC50,3CC50,6CC50

6、,9CC50的神蜂精對HSV-1病毒吸附的抑制率分別為29.17％,31.25％,32.08％,32.08％。四個梯度濃度的蜂毒肽對HSV-1病毒合成的抑制率分別為29.05％,29.91％,31.69％,33.06％。四個梯度濃度的神蜂精對HSV-1病毒合成的抑制率分別為23.12％,23.49％,24.25％,23.72％。四個濃度的蜂毒肽對HSV-1病毒釋放的抑制率分別為29.31％,18.37％,13.28％,10.70％。四個

7、梯度濃度的神蜂精對HSV-1病毒釋放的抑制率分別為42.89％,33.77％,31.32％,30.67％。
　　 ⑸小鼠在注射0.05 mL100LD50 HSV-1病毒液感染后,連續(xù)兩天進行蜂毒肽和神蜂精腹腔注射給藥,小鼠感染病毒后第4天進行免疫組化試驗,結果顯示：正常試驗組,病毒對照組,低、中、高劑量蜂毒肽組,低、中、高劑量神蜂精組小鼠的腦細胞p21 WAF1/CIP1蛋白陽性細胞率分別為100％,2.1％±0.6,14.2

8、％±0.4,28.5％±0.6,33.8％±0.8,13.7％±0.5,22.3％±0.4,29.4％±0.6。各試驗組小鼠腦細胞的p53蛋白的陽性細胞率分別為3.5％±0.2,40.2％±0.5,31.2％±0.5,22.4％±0.4,20.5％±0.3,27.3％±0.6,20.9％±0.3,14.1％±0.2。經層析分離蜂毒得到的電泳級純度的蜂毒肽和蜂毒制劑神蜂精通過抑制病毒的吸附、合成和釋放,從而達到體內外抗HSV-1病毒的作用

9、,進而調節(jié)小鼠腦細胞p21 WAF1/CIP1和p53蛋白的表達,調節(jié)細胞周期,保護細胞DNA免受HSV-1的損傷。神蜂精中蜂毒肽的含量約為0.05 mg/mL,100uL1CC50神蜂精所含蜂毒肽約為0.0002 mg,100uL1CC50蜂毒肽溶液含蜂毒肽0.00799mg。神蜂精中的蜂毒肽含量只有相應試驗濃度的蜂毒肽溶液的1/40。比較試驗組神蜂精和蜂毒肽的體內外抗HSV-1病毒的能力,抑制病毒吸附、合成和釋放的能力,對蛋白p53