清火敗毒飲調(diào)理巨噬細胞高遷移率族蛋白1表達的研究.pdf

1、本文研究目的：以燒傷血清及中藥清火敗毒飲方(Qing Huo Bai DuYin，QHBDY)血清干預(yù)RAW264.7巨噬細胞，觀察晚期炎癥因子高遷移率族蛋白 1(high mobility group box chromosomal protein 1，HMGB1)在RAW264.7巨噬細胞中表達的變化情況，以求了解中藥QHBDY抗炎癥反應(yīng)的細胞內(nèi)源性保護機制。 方法：以RAW264.7巨噬細胞為研究對象，通過SD大鼠正常血清

2、、燒傷血清和中藥血清干預(yù)細胞，應(yīng)用瑞氏染色觀察細胞形態(tài)學(xué)的變化；四唑鹽比色試驗(MTT比色試驗)了解血清干預(yù)后細胞活力的變化；RT-PCR技術(shù)了解細胞中HMGB1表達的變化情況。 結(jié)果：應(yīng)用5％、10％和20％濃度的正常血清、燒傷血清和中藥血清干預(yù)RAW264．7細胞，①不同濃度的同類血清對RAW264.7巨噬細胞的活力影響無顯著差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；②相同濃度的三種血清均使細胞的活力隨著干預(yù)時間的延長逐漸減低，且

3、中藥血清組活性>燒傷血清組活性>正常血清組活性，其影響存在差異(P<0.05)；③相同時間點用不完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的RAW264.7細胞的吸光光度值(OD)低于完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的RAW264.7細胞的OD值，兩組比較具有差異性(P<0.05)，因此小牛血清可為細胞生長提供營養(yǎng)物質(zhì)。 以20％濃度的正常血清、燒傷血清和中藥血清干預(yù)RAW264.7細胞，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測細胞中HMGB1表達的變化，發(fā)現(xiàn)①正常RAW264.7巨噬細胞

4、中有少量HMGB1表達；②正常血清干預(yù)RAW264.7巨噬細胞后，HMGB1的表達量在正常RAW264.7巨噬細胞HMGB1表達量水平周圍波動，在干預(yù)后24小時及48小時出現(xiàn)兩個小的高峰期，與正常RAW264.7巨噬細胞HMGB1表達量無顯著差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；③應(yīng)用燒傷血清干預(yù)的RAW264.7巨噬細胞，其HMGB1的表達量在干預(yù)3小時增高后又降為低水平表達，至18小時后急劇增加，于36小時達到高峰(為正常水平的15～