抗人胰腺癌細(xì)胞單克隆抗體的制備及初步放射免疫顯像研究.pdf

1、目的：制備抗人胰腺癌細(xì)胞單克隆抗體(McAb)，并對其特性進(jìn)行鑒定及進(jìn)行放免顯像的初步研究，為抗人胰腺癌細(xì)胞單克隆抗體在胰腺癌的早期診斷和治療的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法：以胰腺癌細(xì)胞系Para8988免疫Balb/c小鼠，取其脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合，經(jīng)選擇培養(yǎng)，篩選及克隆化后，建立雜交瘤細(xì)胞系。運用ELISA方法篩選；用瓊脂糖雙擴(kuò)散法鑒定IgG亞類；flowcytometry及免疫組化鑒定抗體組織特異性；以MTT法

2、研究抗體對胰腺癌細(xì)胞的殺傷作用；免疫沉淀法檢測該抗體所結(jié)合抗原的相對分子量；用90Tcm標(biāo)記該抗體進(jìn)行放免顯像的實驗研究。 結(jié)果：經(jīng)選擇培養(yǎng)，篩選及克隆化后，得到一株能穩(wěn)定分泌抗人胰腺癌細(xì)胞單克隆抗體的細(xì)胞株2F4A7(D1)。Ig類及亞類鑒定結(jié)果表明，2F4A7(D1)抗體類型為IgGl亞類。間接ELISA檢測腹水效價為l：16000；流式細(xì)胞儀檢測表明：該抗體與Para8988細(xì)胞呈陽性反應(yīng)p90％)，與肝癌、腎癌、胃癌、肺

3、癌、乳腺癌呈陰性反應(yīng)(<5％)；MTT法示抗體對胰腺癌細(xì)胞的殺傷率明顯高于對照組；單克隆抗體McAb2F4A7(D1)與人乳腺癌組織、肝癌組織、卵巢癌組織、胃癌組織、肺癌組織以及正常胰腺組織的免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果表明，2F4A7(D1)的特異性較好；單克隆抗體McAb2F4A?(D1)經(jīng)99Tcm標(biāo)記后，用于荷胰腺癌裸鼠的放射免疫定位顯像。9只荷人胰腺癌裸鼠在注射人胰腺癌細(xì)胞后8周，注射部位腫瘤長至約2cm3。尾靜脈注入99Tcm標(biāo)記的