納米載體介導的hTERT反義寡核苷酸在體內外對EC9706細胞端粒酶表達的影響.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文納米載體介導的hTERT反義寡核苷酸在體內外對EC9706細胞端粒酶表達的影響姓名：王瑾申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：李惠翔張振中20070501鄭州犬學2007屆碩士畢業(yè)論文納米載體介導的hTFRT反義寡棱苷酸在體內外對EC9706細胞端豐亟酶表選的影響(oligonucleotides，ODNs)易被胞內核酸酶降解，作用效果較差。因此，尋找合遁的基兇載體保護和攜帶ODNs，使其進入細胞內發(fā)揮

2、作用是基因治療的關鍵。研究者們利用各種不同的病毒或非病毒基因載體保護和攜帶ODNs，目前多聚陽離子載體以其穩(wěn)定、易制各、易進行化學修飾及可以縮合ODN分子形成納米微粒等獨特的優(yōu)勢，保護ODN免受核酸酶的降解的同時，提高了轉染效率，H益受到廠‘泛關注，這其中聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)作為一種新型的多聚陽離子納米載體，是近年來最有臨床應用潛能的非病毒基因載體，可以分為線型PEI(1inepolyethylenim

3、ine，LPEI)和分支型PEI(branch—polyetIlylenimine，BPEI)兩種類型，不僅有較強的結合ODN和粘附細胞的能力，而且可偶聯k導向配體等，合成更復雜的ODN釋放系統(tǒng)，文獻報道NGR(N：天冬酰氨酸，G：氨基乙酸，R：精氨酸)多肽，可以與腫瘤新生血管受體CDl3特異性結合，具有靶向腫瘤細胞特l、，用于體內基因治療。本實驗中制備了線型一聚乙烯亞胺(L—PEI)／端粒酶逆轉錄酶(hTERT)反義寡核苷酸(ASOD

4、N)納米復合物，在體外轉染食管癌細胞株(EC9706)，同時制備了NGR修飾的L—PEI／ASODN靶向納米復合物，靜脈注射入裸鼠體內，分別觀察hTERTASODN對EC9706細胞的hTERT基岡、蛋白表達的影響，試圖驗證體內實驗中NGR／PEI／ASODN靶向納米復合物的穩(wěn)定性和可‘行性，為其靶向腫瘤的治療提供實驗依據，為該新型納米載體在食管癌治療中的應用提供理論基礎。方法和材料：1設計互補丁hTERTDNA的ASODN，及一條1F

5、義寡核苷酸fsenseoligodeoxynucleotides，SODN)，制備L—PEl／ASODN納米復合物，轉染EC9706細胞。2體外細胞實驗方法21食管癌EC9706細胞，用含lO％優(yōu)質胎牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)基，于37℃、5％C02飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。22實驗分組：cell組：ASODN組：RPMI一164010％胎牛血清培養(yǎng)液(空白對照組)RPMI1640lO％o／]fi牛血清培養(yǎng)液加入ASODN溶液