替莫唑胺耐藥的惡性膠質瘤細胞系耐藥特性演變的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學碩士學位論文替莫唑胺耐藥的惡性膠質瘤細胞系耐藥特性演變的研究姓名：潘強申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學神外指導教師：楊學軍20100501天津醫(yī)科大學碩士學位論文及細胞存活率；用Westernblot、RTPCR、免疫組化及免疫熒光方法檢測耐藥機理及增加T№濃度后導致膠質瘤耐藥細胞生長受抑制的可能原因。歷經(jīng)8個月成功建立了對TMZ耐藥的U251／TR，U251／TR細胞ICso(220879M)是未經(jīng)誘導U251細胞IC50(

2、33129M)的667倍(P001)，其耐藥指數(shù)(RF)約為7；U251廠rR細胞MGMT表達較未經(jīng)誘導U251細胞明顯增加(P001)：同時本實驗發(fā)現(xiàn)倍增替莫唑胺濃度仍可以使耐藥細胞生長出現(xiàn)受抑制現(xiàn)象，U251／TR細胞MGMT檢測結果顯示其表達有相應下降。第二部分探討沙利度胺聯(lián)合替莫唑胺是否對U251／TR耐藥細胞耐藥特性有影響，并研究其可能機制。用MTT法檢測耐藥指數(shù)及細胞存活率；用Westernblot、RTPCR、免疫熒光等方

3、法檢測蛋白表達水平：用甲基化特異性PCR檢測MGMT啟動子甲基化情況。給藥24小時后，雙藥聯(lián)合組的細胞存活率明顯降低，48小時后替莫唑胺組細胞存活率也開始下降，且前者降低更明顯，沙利度胺組基本無下降；雙藥聯(lián)合組及替莫唑胺組MGMT蛋白下降，兩組下降水平無差異；甲基化特異性PCR結果顯示啟動子區(qū)甲基化情況無改變。結論：1MGMT表達水平增高是導致U251／TR對TMZ耐藥的主要機制；替莫唑胺可以通過消耗MGMT，從而改變耐藥細胞耐藥特性，