電針對兔膝骨關節(jié)炎軟骨水通道蛋白3表達的影響.pdf

1、目的:骨關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種以關節(jié)軟骨進行性退變、破壞以及骨贅形成為特征的慢性骨關節(jié)病，好發(fā)于膝關節(jié)、髖關節(jié)、脊柱以及遠端指間關節(jié)等負重較大的關節(jié)。臨床可產生關節(jié)疼痛，活動受限和關節(jié)畸形等癥狀。膝關節(jié)是OA最常發(fā)生的部位，研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白3(Aquaporin3，AQP3)能夠推動膝OA的發(fā)展，膝OA患者軟骨細胞的AQP3表達明顯高于正常關節(jié)軟骨細胞。膝OA作為一種老年進行性退化性疾病，目前尚無徹底治愈的

2、手段，主要采取手術和非手術治療來延緩病情的進展，而電針是一種具有較好臨床療效的非手術治療方式。目前電針治療膝OA的臨床觀察較多，但以其作為干預手段進行作用機制研究的動物實驗卻比較少見。因此，本課題采用管型石膏伸膝位固定制動法固定6周制作兔膝OA模型，電針干預4周的治療，來探討電針對兔膝OA發(fā)展及其關節(jié)軟骨中AQP3表達的影響以及通過調控AQP3的表達來干預膝OA發(fā)展的可行性，為膝OA的治療尋找新靶點。
　　方法:(1)預實驗:瀘州

3、醫(yī)學院實驗動物中心采購健康新西蘭大白兔5只，雌雄不拘，重量2.3-3.2kg，取右后膝關節(jié)用管型石膏固定在膝關節(jié)伸直位，固定范圍從腹股溝平面下1.5cm到踝關節(jié)下3cm處。制動6周后，手術刀切取股骨內側髁及脛骨平臺的軟骨組織，進行蘇木精-伊紅染色。結果可見軟骨細胞排列紊亂、有增生，軟骨表面變薄、有裂隙產生、軟骨組織纖維化，軟骨和滑膜腫脹，有炎細胞的浸潤，滑膜增生。與骨關節(jié)炎的病理表現(xiàn)復合，說明造模成功。(2)對象和干預措施:瀘州醫(yī)學院實

4、驗動物中心再次采購健康新西蘭大白兔36只，雌雄不拘，重量2.3-3.2kg，采用隨機數字表法將36只白兔隨機分成空白對照組、模型組和實驗組，每組各12只?？瞻讓φ战M不做任何處理，模型組和電針治療組均造模，6周后，取下石膏管型。模型組造模后不做電針治療，只在電針治療組電針的同時用相同的姿勢綁在治療臺上;電針治療組自取下石膏當天開始給予電針治療。取血海、犢鼻、陰陵泉、陽陵泉、足三里、梁丘6穴，接3組電針儀輸出線，輸出頻率為2Hz的疏波，留針

5、20min，每日1次，連續(xù)治療14天。實驗結束后，采用頸椎脫臼法處死所有兔子，觀察相關指標的變化。(2)指標的觀察:①依照改良的Mankin's評分標準對空白對照組、模型組、電針治療組3組兔右后膝關節(jié)軟骨大體形態(tài)采用肉眼觀察的方法進行量化評分;②手術刀切取空白對照組、模型組、電針治療組3組兔右后膝關節(jié)的股骨內側髁軟骨，用10％中性甲醛溶液固定后，再行石蠟包埋和切片，作HE染色，依照改良的Mankin's評分標準對軟骨細胞的形態(tài)采用光鏡的

6、方法對觀察結果進行量化評分;③酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測膝關節(jié)液中AQP3表達:用抗兔人AQP3的ELISA試劑盒檢測所采集兔右后膝關節(jié)液中AQP3的表達。(3)統(tǒng)計學處理:采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析。所得計量資料結果采用(x)±s表示，采用t檢驗比較兔軟骨細胞評分、軟骨結構評分、HE染色評分和潮線完整性評分，以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。<

7、br>　　結果:(1)軟骨大體形態(tài)觀察:空白對照組12只兔右后膝關節(jié)無關節(jié)積液，無炎性細胞的浸潤，軟骨表面光滑、無裂紋，呈藍白色，色深明亮。軟骨大體形態(tài)的改良Mankin's評分為0分。模型組右后膝關節(jié)出現(xiàn)明顯關節(jié)積液，軟骨表面粗糙、有裂紋、光澤度降低，有炎性細胞的浸潤，軟骨表面呈灰黃色，部分出現(xiàn)糜爛和潰瘍;電針治療組與模型組情況類似，但損害程度較輕，按改良的Mankin's評分比較軟骨結構，差異有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。(2) H

8、E染色病理學觀察:空白對照組示關節(jié)軟骨細胞位置排列整齊，細胞大小相同，潮線完整;軟骨層厚度一致，軟骨表面平坦整齊;模型組軟骨層存在缺損，軟骨層變薄，軟骨細胞減少明顯，細胞大量簇聚，潮線紊亂;電針治療組關節(jié)軟骨表面無明顯缺失，軟骨細胞排列較模型組整齊，數量較模型組增多，層厚較模型組增厚，可見潮線紊亂。將空白對照組與模型組、模型組與電針治療組的改良的Mankin's評分結果進行比較，差異均有顯著性意義（P＜0.05）。(3)免疫學ELISA