髓樣化因子88(MyD88)功能區(qū)變異顯著影響中國(guó)荷斯坦奶牛臨床型乳腺炎易感性.pdf

1、乳腺炎是奶牛最常見(jiàn)的疾病之一,目前仍然沒(méi)有被攻克,臨床型乳腺炎是奶牛養(yǎng)殖戶面臨的嚴(yán)重問(wèn)題,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。革蘭氏陰性菌是引起奶牛臨床型乳腺炎的重要原因,而且患臨床型乳腺炎的奶牛往往有明顯的臨床癥狀,甚至?xí)饌€(gè)體的死亡。Toll樣受體( Tol-l like receptors,TLRs)家族是一組具有重要功能的,且介導(dǎo)天然免疫的模式識(shí)別受體。雖然不同的TLR所識(shí)別的病原相關(guān)分子(PAMPs)有所側(cè)重,髓樣分化因子88(myeloi

2、d differentiation factor88,MyD88),依舊是此類受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵的連接蛋白,也是信號(hào)向下游轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵靶分子。在奶牛臨床型乳腺炎中主要作用是介導(dǎo)促炎癥反應(yīng)和免疫抑制信號(hào)傳遞。然而,MyD88基因突變及其對(duì)奶牛臨床乳腺炎的易感性鮮為人知的。
　　本文應(yīng)用單鏈構(gòu)象多態(tài)方法(single-strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)分析中國(guó)荷斯坦奶牛MyD88基

3、因的多態(tài)。5個(gè)與乳腺炎相關(guān)的單核苷酸多態(tài)(single nucleotide polymorphism,SNP)被發(fā)現(xiàn),分別在外顯子1、內(nèi)含子2、外顯子3和內(nèi)含子4。第一外顯子信號(hào)肽部位的1個(gè)SNP位點(diǎn)g.9 A→C(3Glu→Asp)位于等位基因B,導(dǎo)致蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變;在成熟的MyD88蛋白中,兩個(gè)關(guān)鍵的SNPs導(dǎo)致氨基酸的改變:g.1755 G→A(180Arg→Gln)位于等位基因F, g.1858 G→T(214 Lys→

4、Asn)位于等位基因G。它們都影響蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),但對(duì)六種預(yù)測(cè)蛋白進(jìn)行三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)它們完全一致。有趣的是, BB(突變型g.9 A/C),CD(雜合型g.1516 C/G), FF(突變型g.1755 G/A),GG(突變型g.1858 G/T)以及II(突變型g.2270 A/G)這些基因型的奶牛發(fā)病率明顯高于本研究中的其他基因型(p<0.01)。研究結(jié)果表明,這些SNPs可能影響了MyD88蛋白的分泌和MyD88蛋白對(duì)TL