三氯乙烯致敏小鼠體內Treg細胞變化的研究.pdf

1、三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)是工業(yè)上廣泛使用的一種有機溶劑,在五金、電子、玩具等行業(yè)作為金屬部件和電子元件的清洗劑、脫脂劑。在我國職業(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎(ODMLT)的發(fā)病人數(shù)不斷上升,已成為TCE接觸工人健康危害的突出問題。ODMLT的發(fā)病機制,大多觀點認為是T淋巴細胞介導的IV型變態(tài)反應。對于ODMLT中炎癥性反應的發(fā)生機制方面,多數(shù)學者進行了大量研究,但有關TCE免疫性損傷的調節(jié)機制研究還剛起步。調節(jié)性

2、T細胞是一種不同于Th1和Th2的具有免疫抑制功能的T細胞群,在免疫抑制或免疫耐受過程中發(fā)揮重要作用,主要通過分泌IL-10、TGF-β發(fā)揮抑制作用。
　　目的：
　　通過檢測TCE致敏小鼠脾臟Treg細胞比例,以及外周血和皮膚組織中抗炎性細胞因子白細胞介素(IL-10)、轉化生長因子-β(TGF-β)的表達水平,研究CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞在TCE引起的免疫應答中動態(tài)變化情況,探討CD4+CD25+Fox

3、p3+Treg細胞在TCE致敏中的作用,為最終闡明TCE的危害及其機理并制定防治對策提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　選用6~8周健康雌性BALB/c小鼠80只,隨機分成空白對照組、TCE處理組。建立BALB/c小鼠致敏模型,觀察記錄小鼠背部受試部位的皮膚致敏反應情況。根據(jù)末次激發(fā)24h后小鼠的致敏結果以及取材時點的不同(分別于末次激發(fā)后1d、2d、3d、7d、14d采血,無菌取皮膚組織和脾臟),將TCE處理組分為致敏1d組、

4、致敏2d組、致敏3d組、致敏7d組、致敏14d組和未致敏1d組、未致敏2d組、未致敏3d組、未致敏7d組、未致敏14d組。脾臟單個核細胞懸液用相關熒光標記的抗體染色后采用流式細胞術分析。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組血清中IL-10、TGF-β水平。免疫組織化學法檢測皮膚組織中IL-10、TGF-β的表達。
　　結果：
　　1.致敏率
　　皮膚致敏反應試驗中,空白對照組背部皮膚均沒有發(fā)現(xiàn)紅斑和水腫;TCE處理組75只小鼠中

5、有27只出現(xiàn)背部皮膚的紅斑或水腫,致敏率為36％。
　　2.脾臟Treg細胞的比例
　　末次激發(fā)后,各組小鼠脾臟組織CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞比例:致敏1d組CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞比例較空白對照組升高不明顯;與空白組對照組、致敏1d組相比,致敏2d組和3d組均顯著升高,差異均有統(tǒng)計學意義;致敏3d組比例最高,但與致敏2d組比較,差異無統(tǒng)計學意義;與致敏2d組和3d組比較,致敏7d組和14d

6、組又明顯下降。同時點的比較,致敏2d、3d組分別高于未致敏2d、3d組,差異均有統(tǒng)計學意義。
　　3.血清IL-10和TGF-β水平
　　末次激發(fā)后,各組小鼠血清中 IL-10的水平:所有致敏組顯著高于空白對照組; IL-10的水平在致敏組有“先升后降”的趨勢,在末次激發(fā)后3天達到最高,且致敏2d、3d、7d、14d組均高于致敏1d組,差異有統(tǒng)計學意義。同時點的比較,致敏組IL-10的水平均高于未致敏組,但差異無統(tǒng)計學意義,

7、除了未致敏14d組。
　　末次激發(fā)后,各組小鼠血清中TGF-β的水平:致敏1d、2d、3d、14d組顯著高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義;致敏3d、7d、14d組均低于致敏1d組,差異有統(tǒng)計學意義;致敏3d、7d組低于致敏2d組,差異有統(tǒng)計學意義。同時點的比較,致敏2d組TGF-β的水平均高于未致敏2d組(P<0.05),其他致敏組均高于未致敏組,但是差異無統(tǒng)計學意義。
　　4.皮膚組織IL-10和TGF-β表達
　　

8、末次激發(fā)后,各組小鼠皮膚組織中IL-10的水平:致敏1d、2d、3d組較空白對照組顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義;致敏7d、14d組顯著降低,與致敏1d、2d、3d組比較,差異均有統(tǒng)計學意義。同時點的比較,致敏1d、2d、3d組分別高于未致敏1d、2d、3d組,差異均有統(tǒng)計學意義。
　　末次激發(fā)后,各組小鼠皮膚組織中TGF-β的水平:致敏1d、2d、3d、7d組較空白對照組顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義;致敏2d、3d組較致敏1d組升高,

9、差異均有統(tǒng)計學意義;與致敏3d組比較,致敏7d、14d組下降,差異均有統(tǒng)計學意義;致敏14d組降至最低,與致敏7d組比較,差異有統(tǒng)計學意義。同時點的比較,致敏1d、2d、7d組分別高于未致敏1d、2d、7d組,差異均有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1. TCE在一定劑量下能對小鼠致敏,致敏率為36%,TCE對BALB/c小鼠皮膚具有中度致敏作用。
　　2. Treg細胞及其分泌的IL-10、TGF-β在TCE接觸過敏性