人類(lèi)子宮組織短期冷缺血保存的研究.pdf

1、背景：
　　由于子宮畸形，子宮切除及子宮無(wú)功能等原因?qū)е碌牟辉蟹Q(chēng)為子宮源性不孕。子宮移植是將來(lái)治療子宮源性不孕患者的有效方法。對(duì)于子宮移植來(lái)說(shuō)，需要解決移植手術(shù)技術(shù)相關(guān)問(wèn)題，免疫抑制與抗排斥問(wèn)題，移植子宮妊娠及分娩和胎兒生長(zhǎng)發(fā)育等相關(guān)問(wèn)題。而在子宮移植手術(shù)中，供體子宮的離體保存為手術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)之一。低溫加保存液是目前臨床應(yīng)用最普遍的保存方法。但是低溫和缺氧同樣會(huì)引起冷缺血/再灌注損傷。例如低溫會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞水腫，缺氧導(dǎo)致細(xì)胞能量物質(zhì)的

2、耗竭，細(xì)胞凋亡等等。因此，臨床器官保存都存在保存時(shí)限的問(wèn)題，像心臟保存6小時(shí)，腎臟可以保存36小時(shí)。本課題選取人類(lèi)子宮組織的短期缺血保存進(jìn)行前期的研究，來(lái)探討人類(lèi)子宮肌層組織和內(nèi)膜組織對(duì)冷缺血保存的耐受力，并比較其在不同保存液中的保存效果，為將來(lái)的子宮移植技術(shù)或者器官克隆技術(shù)中子宮的離體保存提供相應(yīng)指導(dǎo)。
　　目的：
　　通過(guò)將小塊人類(lèi)子宮組織離體保存于4℃UW液、HTK液和林格氏液（Rs）中6，24h后進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，得出人

3、類(lèi)子宮組織在冷缺血保存中的保存時(shí)限，并比較其在不同保存液中的保存效果，探討何種保存液為其最佳保存液，為下一步的子宮移植手術(shù)提供理論參考和技術(shù)支持。
　　（一）探討人類(lèi)子宮組織對(duì)冷缺血損傷的耐受時(shí)限
　　方法：
　　將小塊人類(lèi)子宮組織保存在4℃林格氏液和UW液中6h、24h，達(dá)到保存時(shí)間后，用以下方法觀察組織的冷缺血損傷：
　　1．光鏡觀察子宮組織病理學(xué)的改變
　　2．電鏡觀察子宮組織超微結(jié)構(gòu)的改變
　

4、　3．觀察子宮肌收縮和對(duì)催產(chǎn)素的反應(yīng)
　　結(jié)果：
　　5例標(biāo)本中，保存在UW液6、24h，和保存在Rs液6、24h，所有保存標(biāo)本中內(nèi)膜和肌層在光鏡下均沒(méi)有改變，沒(méi)有組織學(xué)改變表明細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、壞死、核變性、及肌纖維的斷裂等。
　　在電鏡下，所有UW組及保存6h Rs組沒(méi)有明顯改變，但在Rs保存24h組出現(xiàn)嚴(yán)重的退化性改變，線粒體出現(xiàn)不同程度的腫脹，細(xì)胞核出現(xiàn)改變（染色質(zhì)粗染）。
　　與對(duì)照組相比，所有的保存組中的

5、肌肉收縮能力都減弱了。UW組和6h Rs組的所有標(biāo)本在用了小劑量催產(chǎn)素時(shí)都出現(xiàn)了自主收縮，然而，保存在24h Rs組無(wú)一例出現(xiàn)收縮。保存在 UW液6小時(shí)的標(biāo)本收縮的曲線與對(duì)照組相似，但是在保存24h時(shí)有明顯的改變。保存在Rs液中的標(biāo)本與UW液中相比收縮圖形缺乏規(guī)則性和節(jié)律性。
　　結(jié)論：
　　人類(lèi)子宮組織至少可以耐受6h的冷缺血損傷。而低溫保存在UW液中，至少可以保存24h。
　　（二）比較UW液和HTK液對(duì)人類(lèi)子宮組

6、織的保存效果
　　方法：
　　將小塊人類(lèi)子宮組織分別保存在4℃UW液、HTK液和林格氏液中6h、24h，達(dá)到保存時(shí)間后，用以下方法檢測(cè)組織液的保存效果：
　　1.測(cè)定各保存組子宮組織的Na+-K+ATP酶活性。
　　2.測(cè)定各保存組子宮組織中總谷胱甘肽/還原型谷胱甘肽的濃度。
　　結(jié)果：
　　保存6h和24h的組織中Na+-K+ATP酶的活性，HTK組與UW組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但

7、與對(duì)照組林格氏液相比，兩組明顯高于林格氏液組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　保存6h，UW液保存組總谷胱甘肽和還原型谷胱甘肽的含量與保存相同時(shí)段的HTK組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。保存24h，UW液中標(biāo)本的總谷胱甘肽和還原型谷胱甘肽的含量均比保存相同時(shí)段的HTK組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組林格氏液兩者的含量均低于HTK組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　人