雷公藤制劑的指紋圖譜與抗炎細(xì)胞藥效學(xué)研究.pdf

1、雷公藤制劑廣泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病，療效確切。但其臨床應(yīng)用不良反應(yīng)高發(fā)，不同廠家制劑療效和不良反應(yīng)存在較大差異，如何使其臨床應(yīng)用安全有效是雷公藤研究的熱點(diǎn)及難點(diǎn)。鑒于雷公藤成分和結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，目前僅對(duì)雷公藤內(nèi)酯醇或雷公藤內(nèi)酯甲進(jìn)行控制，缺乏完善的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本文建立了8個(gè)不同廠家雷公藤制劑的高效液相指紋圖譜，以脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞為藥效模型，進(jìn)行不同廠家雷公藤制劑的抗炎作用研究

2、，初步考察了雷公藤制劑指紋圖譜與抗炎活性之間的譜效關(guān)系。
　　為了使指紋圖譜更好的表征雷公藤制劑的特征信息，本課題采用高效液相色譜分析方法，以共有特征峰的峰面積和分離度為指標(biāo)，對(duì)雷公藤制劑的提取純化條件進(jìn)行考察。通過對(duì)提取溶劑、提取時(shí)間、固相萃取柱種類、洗脫溶劑、洗脫體積依次進(jìn)行選擇，初步確定雷公藤制劑提取物制備工藝為:乙酸乙酯作為提取溶劑，超聲10min進(jìn)行提取，中性氧化鋁柱作為純化柱，以10mL乙酸乙酯洗脫并收集。
　　

3、對(duì)制備的雷公藤制劑提取物進(jìn)行高效液相分析，對(duì)色譜條件（包括色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)、洗脫梯度等）進(jìn)行了優(yōu)化，完成了系統(tǒng)的方法學(xué)考察，建立了8個(gè)不同廠家雷公藤制劑的高效液相指紋圖譜。運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版”軟件處理，生成對(duì)照指紋圖譜，確定了11個(gè)共有特征峰。對(duì)8個(gè)廠家樣品指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，結(jié)果表明，不同廠家雷公藤制劑之間的相似度相差較大，說(shuō)明廠家間產(chǎn)品差異大，推測(cè)是藥材來(lái)源不同以及生產(chǎn)工藝存在差異。

4、　　采用1μg·mL-1的脂多糖刺激RAW264.7細(xì)胞建立體外細(xì)胞炎癥模型，以腫瘤壞死因子-α、白介素-6和一氧化氮含量為指標(biāo)，對(duì)8個(gè)廠家雷公藤制劑提取物進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同廠家雷公藤制劑提取物的抗炎活性存在顯著差異，抗炎作用強(qiáng)弱與雷公藤制劑提取物的濃度之間呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。
　　最后，采用多元線性回歸分析中的偏最小二乘法，將指紋圖譜中共有峰的峰面積數(shù)據(jù)與雷公藤制劑提取物的抗炎作用結(jié)果進(jìn)行回歸分析，得到4個(gè)能夠表

5、征雷公藤制劑提取物抗炎活性的多元線性回歸方程:(1)Y=-0.052X1-0.078X2-0.060X3-0.046X4-0.027X5+0.002X6-0.055X7-0.050X8-0.106X9-0.048X10-0.164X11;(2)Y=0.071X1-0.028X2-0.033X3-0.004X4-0.012X5-0.018X6-0.039X7-0.058X8-0.173X9-0.148X10-0.230X11;(3)Y=-