胞質非特異性肌肽酶(CNDP2)、胞外基質蛋白多糖(Versican)在胃癌中的作用及機制研究.pdf

1、胃癌具有較高的發(fā)病率、轉移率和死亡率，進一步探尋研究胃癌相關的癌基因或抑癌基因，探究胃癌轉移的相關領域，對胃癌的預防、診斷和治療等均具有重大意義。某些癌基因或抑癌基因的表達改變是誘導胃癌產生的主要因素;而表觀遺傳改變致使基因或基因組的持續(xù)損傷，繼而改變細胞生長的微環(huán)境，從而促進了腫瘤的侵襲和遷移。因此，本課題主要從抑癌基因和腫瘤轉移相關分子兩個具有不同調控主體的層面，對胃癌發(fā)生和轉移的分子機制進行探討。
　　 第一章胞質非特異性

2、肌肽酶CNDP2作為抑癌基因在胃癌中的生長抑制及機制研究
　　 胞質非特異性激肽酶(CNDP2)在人體組織中普遍表達，越來越多的實驗證據表明，該肌肽酶在腫瘤中不僅僅展現其酶促活性，同時還具有酶活之外的其他重要功能。然而，在胃癌中CNDP2的表達狀態(tài)及分子功能研究尚是空白。本研究，在包含胃癌癌旁正常粘膜胃癌組織樣本182例的組織芯片中，利用免疫組化、RT-PCR、Q-RT-PCR等實驗技術分別從mRNA水平和蛋白水平檢測CNDP2

3、的表達。并結合臨床病理資料對實驗結果統(tǒng)計分析，探尋CNDP2在人胃癌中表達的臨床意義。之后，我們成功構建上調CNDP2的質粒GV142和下調CNDP2的慢病毒，分別轉染胃癌細胞株AGS和SGC-7901，之后，以兩轉染細胞株為研究對象，通過CCK-8、克隆集落形成等一系列細胞學功能實驗及周期觀察，探索胃癌細胞株CNDP2的表達對腫瘤細胞增殖、周期的影響。結果證實:相對于癌旁的正常組織，CNDP2在胃癌組織中普遍低表達，且CNDP2的表達

4、在不同胃癌細胞系中隨細胞分化不同而改變。功能上，CNDP2的上調導致了AGS細胞株的生長抑制、凋亡增加、細胞周期G1期阻滯和ROS產生的增多;同時，CNDP2過表達的穩(wěn)轉株抑制了裸鼠體內腫瘤的生長。反方面，我們證明，慢病毒轉染使CNDP2表達沉默后，轉染過的SGC-7901細胞株顯示出細胞生長增加和體內荷鼠瘤加快生長的現象。此外，我們實驗還發(fā)現:CNDP2的過表達能夠導致p38的表達上調和JNK的激活;而CNDP2表達沉默反增加了ERK

5、的磷酸化，對p38和JNK無影響。提示，在胃癌的腫瘤抑制功能上，CNDP2可能激活了不同的MAPK分子信號通路。因此，通過實驗我們得出:胞質非特異性肌肽酶CNDP2在胃癌中更主要的是體現其抑癌基因的特性，CNDP2抑制胃癌的發(fā)生發(fā)展是通過不同的MAPK分子信號通路來實驗的。
　　 第二章胞外基質蛋白多糖Versican在IL-11促胃癌細胞增殖遷移作用中的研究胞外基質蛋白多糖Versican是細胞外基質(extracellula

6、r matrix，ECM)中無處不在的表達成分。Versican在腫瘤間質和腫瘤細胞中聚集表達，且受多種細胞因子的調節(jié)。研究表明Versican能夠調節(jié)ECM的穩(wěn)態(tài);同時異常表達Versican和其亞型均能夠調節(jié)細胞的增殖、分化及遷移，從而促進腫瘤的侵襲和遷移。白介素-11(Interleukin-11，IL-11)作為一重要的細胞因子，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著廣泛的生物學效應。在本研究首先在分析了Versican和其亞型在胃癌組織和胃

7、癌細胞株中的表達情況。發(fā)現:Versican在胃癌中顯著表達上調;在不同細胞株中Versican亞型表達各異;在組織和細胞系中主要表達的是V0和V1亞型;且V1亞型在癌組織中表達上調顯著。處理胃癌細胞株AGS和MKN45以外源性IL-11，不僅能夠引起兩細胞株的增殖上調、遷移增加，而且能夠導致V0和V1亞型在細胞中的顯著表達上調。然而，當Versican的V0和V1表達經siRNA干擾表達沉默后，外源性IL-11的促細胞增殖遷移效應減弱