MicroRNA-155通過(guò)調(diào)節(jié)FOXO3a影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力.pdf

1、 碩士學(xué)位論文 論文題目 MicroRNA-155 通過(guò)調(diào)節(jié) FOXO3a 影響 膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力 研 究 生 姓 名 凌 南 指導(dǎo)教師姓名 李向東 專 業(yè) 名 稱 神經(jīng)外科 研 究 方 向 顱腦腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究 論文提交日期 2013 年 5 月 MicroRNA-155 通過(guò)調(diào)節(jié) FOXO3a 影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力 中文摘要 I MicroRNA-155 通過(guò)調(diào)節(jié) FOXO3a 影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞

2、 的增殖和侵襲能力 中文摘要 【目的 目的】 檢測(cè) miR-155 在膠質(zhì)瘤標(biāo)本及細(xì)胞系中的表達(dá)情況， 探討 miR-155 在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的生物學(xué)功能，并探究其相關(guān)機(jī)制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論基礎(chǔ)?！痉椒?方法】 第一部分：1、選用人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87、U373、U251、SHG44 和 T98, 人腦正常星形膠質(zhì)細(xì)胞株 1800。并收集人腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本 7 例和正常腦組織 2 例。運(yùn)用qRT-PCR 技術(shù)檢測(cè) miR-

3、155 在膠質(zhì)瘤組及正常對(duì)照組中的表達(dá)。2、將 miR-155 的模擬體 mimics 轉(zhuǎn)染至 miR-155 表達(dá)量最低的細(xì)胞株中，將抑制劑 inhibitor（即anti-miR-155）轉(zhuǎn)染至表達(dá)量最高的細(xì)胞株中，通過(guò)流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期、凋亡的變化，通過(guò) CCK-8 方法觀察細(xì)胞的增殖情況，以及應(yīng)用劃痕愈合試驗(yàn)、Transwell 試驗(yàn)了解其對(duì)細(xì)胞遷移、侵襲的影響。 第二部分： 1、 根據(jù)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)軟件 Targ

4、etScan、 PicTar 和 mirBase 對(duì) miR-155靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，分別應(yīng)用 Western blot 和 qRT-PCR 技術(shù)檢測(cè)其可能的靶蛋白FOXO3a 的基因及蛋白表達(dá)情況；2、將靶基因 FOXO3a 的 3'UTR 區(qū)克隆到psi-CHECK2 熒光素酶報(bào)告基因載體下游,通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè) miR-155 對(duì)靶基因 FOXO3a 的 3'UTR 區(qū)的調(diào)控作用。最后過(guò)表達(dá)和抑制表達(dá) miR

5、-155 然后行Western blot 進(jìn)一步檢測(cè) FOXO3a 蛋白水平的變化。 【結(jié)果 結(jié)果】 第一部分：1、MiR-155 在膠質(zhì)瘤組的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)，其中U87 細(xì)胞株表達(dá)量最高，U251 細(xì)胞株表達(dá)量最低。2、U251 細(xì)胞株在轉(zhuǎn)染 miR-155 mimics 后細(xì)胞增殖加快，凋亡率減低，細(xì)胞的遷移及侵襲能力增強(qiáng)，而細(xì)胞周期未見(jiàn)明顯改變。轉(zhuǎn)染 anti-miR-155 至 U87 細(xì)胞株后，呈