三株紅樹(shù)林來(lái)源真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物及其抗腫瘤活性的研究.pdf

1、紅樹(shù)林來(lái)源的微生物生存環(huán)境獨(dú)特,在長(zhǎng)期的自然選擇過(guò)程中形成了獨(dú)特的生物合成途徑,從而有潛力產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、活性獨(dú)特的化合物,是藥物先導(dǎo)化合物的重要來(lái)源。本論文采用抗腫瘤活性篩選和現(xiàn)代化學(xué)分析篩選相結(jié)合的辦法,開(kāi)展了3株紅樹(shù)林來(lái)源的真菌抗腫瘤活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究工作。內(nèi)容包括:微生物的分離和純化;目標(biāo)微生物的篩選和發(fā)酵條件的摸索優(yōu)化;目標(biāo)微生物發(fā)酵;單體化合物的提取、分離、結(jié)構(gòu)解析以及初步抗腫瘤活性評(píng)價(jià)。
　　 本研究從7個(gè)廣西紅

2、樹(shù)林根泥樣品(海芒果根泥、欖李根泥、桐花根泥、秋茄根泥、木欖根泥、海漆根泥和鹵蕨根泥)和4個(gè)海南紅樹(shù)林根泥樣品(白骨壤根泥、扭黃檀根泥、鹵蕨根泥和水黃皮根泥)及1個(gè)海泥樣品中共分離純化出微生物菌株97株,其中真菌56株,放線菌41株。對(duì)97株微生物菌株進(jìn)行了抗腫瘤活性的初篩和復(fù)篩,共篩選出具有細(xì)胞增殖抑制活性的菌株20株,其中8株真菌,12株放線菌。通過(guò)對(duì)這20株活性菌株進(jìn)行液相指紋圖譜分析,選取了其中的3株目標(biāo)真菌作為下步研究的對(duì)象,

3、這三株真菌液相指紋圖譜的共同特質(zhì)是:UV相似的系列吸收峰多,出峰時(shí)間集中在35-60min之間。這些特征提示,這3株真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富,且浸膏的極性適中。通過(guò)對(duì)這3株真菌在各種培養(yǎng)條件下的薄層點(diǎn)板,液相指紋圖譜,活性篩選結(jié)果以及浸膏的產(chǎn)量進(jìn)行分析,確定了各個(gè)目標(biāo)菌株的最優(yōu)發(fā)酵條件。
　　 通過(guò)各種分離純化手段的聯(lián)合應(yīng)用,從三株目標(biāo)真菌ZHN7-08、ZHN1-09和ZHN2-20的發(fā)酵產(chǎn)物的乙酸乙酯提取物中分離得到38個(gè)單體

4、化合物,并對(duì)這38個(gè)單體化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定,發(fā)現(xiàn)新化合物7個(gè),新天然產(chǎn)物1個(gè)。新化合物包括5個(gè)補(bǔ)身烷型倍半萜類化合物(1-5)、1個(gè)細(xì)胞松弛素類化合物(22)和1個(gè)洛伐他汀類化合物(30),新天然產(chǎn)物為補(bǔ)身烷型倍半萜(9)。此外得到的化合物結(jié)構(gòu)類型還包括甾醇類化合物、苯的衍生物、生物堿、甘油酯。
　　 采用MTT和SRB法,對(duì)所分得的單體化合物進(jìn)行了初步體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)。發(fā)現(xiàn)補(bǔ)身烷型倍半萜類化合物16和19對(duì)P388細(xì)胞具有

5、弱的細(xì)胞增殖抑制活性,IC50值分別為22.20和29.54μM;補(bǔ)身烷型倍半萜類新化合物4對(duì)P388細(xì)胞具有中度的抑制活性,IC50值為8.74μM;細(xì)胞松弛素類新化合物23對(duì)P388和A549細(xì)胞分別具有中度和較強(qiáng)的抑制活性,IC50值分別為8.41μM和0.43μM。
　　 本文對(duì)紅樹(shù)林根泥樣品中的微生物進(jìn)行了分離,選擇了其中3株活性真菌進(jìn)行了系統(tǒng)研究,從其次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離鑒定出化合物38個(gè),發(fā)現(xiàn)新化合物7個(gè),新天然產(chǎn)物