卵泡發(fā)育期和胚胎植入期苯與甲醛聯(lián)合暴露致小鼠胚胎毒性.pdf

1、苯和甲醛均是工業(yè)生產(chǎn)中重要的生產(chǎn)原料，廣泛存在于建筑材料和居室裝修材料中。近年來，隨著人們生活水平不斷提高，室內裝飾成為時尚，室內空氣苯和甲醛污染狀況日益嚴重。由于人的大部分時間是在室內度過，因此其對人體健康的危害不容忽視。苯和甲醛導致妊娠失敗、出生缺陷和嬰兒死亡等妊娠結局的不良影響已引起廣泛關注。已有流行病學研究表明，苯或甲醛單獨暴露對女性月經(jīng)周期和生殖機能具有一定影響。動物實驗研究顯示，苯或甲醛均具有一定的胚胎毒性。居室裝修后室內環(huán)

2、境中苯和甲醛等污染物常同時存在，但目前尚缺乏其聯(lián)合暴露時對胚胎發(fā)育影響的研究報道。此外，不同生殖階段暴露于苯或甲醛所引起的胚胎毒性效應及其反應程度可能存在一定差異。本研究采用析因設計安排苯和甲醛聯(lián)合暴露劑量，在小鼠卵泡發(fā)育期和胚胎植入期不同生殖階段染毒，探討其胚胎毒性。 研究目的： 探討小鼠卵泡發(fā)育期和胚胎植入期苯與甲醛聯(lián)合暴露對胚胎植入與植入后胚胎發(fā)育的影響及可能存在的聯(lián)合毒性；比較不同生殖階段暴露于環(huán)境毒物致胚胎毒性

3、的敏感生殖階段階段；通過檢測小鼠卵巢組織細胞DNA-蛋白質交聯(lián)程度進一步觀察胚胎植入障礙卵巢與DNA損傷程度之間的關系，為居室裝修后室內環(huán)境污染物的生殖毒性評價提供理論依據(jù)。 研究方法： 1.建立卵泡發(fā)育期和胚胎植入期苯與甲醛聯(lián)合暴露致小鼠胚胎毒性的動物模型 （1）實驗設計：采用兩因素四水平的析因設計方法安排動物暴露劑量組合。苯和甲醛是其中兩個研究因素，各設四個劑量水平，分別為（0、0.875、8.75、87.5）

4、mg/kg和（0、7.875、15.75、31.5）mg/kg。 （2）暴露設計：暴露時間：卵泡發(fā)育期暴露是在小鼠交配前3d連續(xù)染毒，胚胎植入期暴露是在孕4d-6d連續(xù)染毒。按照設計劑量1次/d，連續(xù)3d。暴露方式：經(jīng)腹腔注射染毒。根據(jù)孕鼠染毒當天體重調整苯和甲醛用量。 （3）促排卵處理：雌性小鼠腹腔注射10U孕馬血清（PMSG），48h后腹腔注射10U人絨毛膜促性腺激素（HCG），按雌雄1：1交配合籠，次日檢查陰栓。查到陰

5、栓日作為孕第1天記為D1，連續(xù)三天合籠無陰栓者棄之。 （4）觀察指標：小鼠孕期體重；D9小鼠肝、脾、腎、子宮、卵巢重量；植入胚胎數(shù)目，植入胚胎總重量。 （5）分析方法：SPSS13.0建立數(shù)據(jù)庫；首先對各指標進行方差齊性檢驗。方差齊性時，進行析因設計的F檢驗；方差不齊性時，采用非參數(shù)秩和檢驗。統(tǒng)計學檢驗水準設為α=0.05。 2.卵巢組織細胞DNA-蛋白質交聯(lián)實驗 分離和裂解卵巢組織細胞，KCL-SDS沉淀法

6、分離組織細胞中游離DNA和DNA-蛋白質交聯(lián)（DPC）中的DNA。加入熒光染料Hoechst33258，陰暗處反應后采用F-4500型熒光分光光度儀在350nm激發(fā)光和450nm發(fā)射光下測定各樣品熒光值。根據(jù)標準曲線定量交聯(lián)DNA和自由DNA，計算DPC系數(shù)。DPC系數(shù)統(tǒng)計分析方法同前。 3.胚胎植入障礙與卵巢組織細胞損傷之間的關聯(lián)性分析 采用Spss13.0軟件包綜合分析苯與甲醛聯(lián)合暴露后對卵巢組織細胞DPC、卵巢重量

7、及胚胎植入數(shù)目的影響，采用pearson相關計算DPC與卵巢重量、胚胎植入數(shù)目間的相關系數(shù)。統(tǒng)計學檢驗水準設為α=0.05。 研究結果： 1.小鼠卵泡發(fā)育期和胚胎植入期苯與甲醛聯(lián)合暴露的胚胎毒性 （1）卵泡發(fā)育期暴露組，甲醛明顯減少胚胎植入數(shù)目和植入胚胎總重量（P分別為0.02和0.00），小鼠卵巢和子宮重量明顯下降（P分別為0.00和0.05）；各劑量苯暴露組未顯示明顯的胚胎和母體毒性（P均大于0.05）；苯和甲

8、醛聯(lián)合暴露時，對卵巢重量的影響有明顯聯(lián)合作用（F=2.17，P=0.02）。 （2）胚胎植入期暴露組，苯或甲醛對小鼠胚胎植入數(shù)目、植入胚胎總重量、胚胎均重均無明顯影響；也未見對小鼠卵巢和子宮重量的影響，但脾臟和腎臟重量變化具有統(tǒng)計學意義（P值均小于0.05）。 （3）共同暴露時苯和甲醛的聯(lián)合作用：卵泡發(fā)育期，與單一甲醛暴露比較，低、中劑量的苯和高劑量甲醛聯(lián)合暴露時，胚胎植入數(shù)目和每窩胚胎總重量呈現(xiàn)出一定的聯(lián)合作用；在胚胎植入

9、期，與單一甲醛暴露時比較，中、高劑量苯和甲醛聯(lián)合暴露時，胚胎植入數(shù)目和每窩胚胎總重量呈現(xiàn)出一定的聯(lián)合作用。 2.卵巢組織細胞DNA-蛋白質交聯(lián) （1）卵泡發(fā)育期暴露，苯對小鼠卵巢組織細胞DPC系數(shù)無明顯影響（P=0.14）；甲醛對小鼠卵巢組織細胞DPC系數(shù)有明顯影響（P=0.00），低劑量、中劑量和高劑量與組內對照比較均有統(tǒng)計學意義（Z值分別為-3.93、-4.85、-4.54，P值分別為0.00，0.00，0.00）。

10、 （2）胚胎植入期暴露，苯對小鼠卵巢組織細胞DPC系數(shù)無明顯影響（P=0.721）；各劑量甲醛對小鼠DPC系數(shù)影響也無統(tǒng)計學意義（P=0.127）。 （3）卵泡發(fā)育期暴露于苯和甲醛，對卵巢組織細胞DPC系數(shù)影響存在聯(lián)合作用（F=39.87，P=0.00*）。 3.胚胎植入障礙與卵巢組織細胞損傷之間的關聯(lián)性 Pearson相關分析結果顯示，卵泡發(fā)育期暴露于甲醛，卵巢組織細胞DPC系數(shù)與卵巢重量之間存在明顯的負相

11、關關系（r=-0.514，P=0.000）；與胚胎植入數(shù)目之間也存在一定程度的負相關關系（r=-0.236，P=0.060）。 結論： 1.卵泡發(fā)育期暴露于甲醛導致胚胎植入數(shù)目減少、植入胚胎總重量減輕；表明在小鼠卵泡發(fā)育期甲醛暴露可導致明顯的胚胎毒性； 2.卵泡發(fā)育期或胚胎植入期暴露于苯對小鼠胚胎植入數(shù)目、植入胚胎總重量、胚胎均重等的毒性作用較??； 3.卵泡發(fā)育期或胚胎植入期暴露于苯和甲醛其胚胎毒性均存在