促紅細胞生成素及黃芪注射液對窒息后血清誘導HK-2細胞損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：研究促紅細胞生成素(Erythropoietin，EPO)對新生兒窒息后血清誘導人近曲腎小管上皮細胞(HK-2)損傷的保護作用及機制。 方法： (1)以HK-2為研究對象。 (2)以窒息后第一天20％(體積分數)血清作為攻擊因素。 (3)第一階段實驗共分為對照組、窒息組和EPO組，EPO組設立5個濃度亞組，探討EPO是否具有保護作用及最適保護濃度。 (4)第二階段實驗以最適保護濃度預處理細胞

2、，攻擊前分為空白對照組和EPO預處理組，在攻擊后15min，1h，2h分為相應時間的血清攻擊組和EPO預處理組后血清攻擊組。 (5)檢測指標：第一階段實驗在倒置相差顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學改變，生化法檢測培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(1actatedehydrogenase，LDH)漏出率和MTT法檢測細胞活力變化；第二階段實驗通過激光共聚焦顯微鏡觀察間接免疫熒光染色NF-κB轉位以及免疫印記(Western blot)檢測NF-κB

3、抑制亞基I-κBα量的變化。 (6)統(tǒng)計學處理：所有數值以均數±標準差((-x)±S)表示，實驗組各時間點進行單因素方差分析，組間進行LSD檢驗。P<0.05為差異有顯著性。采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件完成。 結果： (1)倒置相差顯微鏡下觀察HK-2細胞生長狀況：對照組細胞貼壁良好，透明度大，折光性強，呈扁平的多角形，分裂相多，細胞排列緊密，連接成片，數量多。窒息組細胞生長緩慢，細胞數量比對照組明顯減少，細胞形

4、態(tài)發(fā)生改變，由典型的扁平多角形細胞變?yōu)椴灰?guī)則圓形或橢圓形，折光性減弱，輪廓增強，胞質中出現(xiàn)空泡，脂滴，顆粒樣物質，細胞間空隙加大，連接松散，細胞間可見較多細胞碎片。EPO組：隨濃度的增加，細胞損傷明顯得到改善，當濃度≥50IU/ml時與對照組相似。 (2)與對照組(63.49±1.30％)相比，窒息組LDH漏出率(76.37±1.32％)明顯增加，在EPO組，除EPO 1IU/ml(76.04±1.50％)組外，各濃度EPO與窒

5、息組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。EPO組隨濃度的增加保護效果逐漸增強，LDH漏出率逐漸減小，EPO 100IU/ml(64.55±1.28％)，50IU/ml(64.40±1.84％)組與對照組無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 (3)與對照組(0.642±0.018)相比，窒息組細胞活力(OD值)(0.240±0.036)明顯降低。除EPO 1IU/ml(0.240±0.044)組外，各濃度EPO與窒息組比較，差異均

6、有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。EPO組隨濃度的增加保護效果逐漸增強，EPO 100IU/ml(0.624±0.018)，50IU/ml(0.620±0.016)組與對照組無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 (4)攻擊前與空白對照組(9.7±2.1％)相比，EPO預處理組NF-κB核轉位率(20.0±2.6％)顯著增加；而血清攻擊后各組與空白組對照組比較，NF-κB核轉位率顯著增加，以攻擊后1小時最明顯；各時點EPO預處理組后血清攻擊

7、組與血清攻擊組相比，NF-κB核轉位率顯著減少。 (5)攻擊前與空白對照組(0.52±0.05)相比，EPO預處理組I-κBa/β-actinIOD比值(0.26±0.03)顯著減少；而血清攻擊后各組與空白組對照組比較，I-κBα/β-actinIOD比值顯著減少，以攻擊后1小時最明顯；各時點EPO預處理組后血清攻擊組與血清攻擊組相比，I-κBα/β-actinIOD比值顯著增加。 結論：EPO具有減輕窒息后血清所致HK