番茄高可溶性固形物代謝途徑中相關基因的克隆和分析.pdf

1、番茄可溶性固形物(Brix，或Total soluble solids content簡稱TSS)對番茄品質有著重要的影響，其含量的高低直接影響番茄的甜度、酸度和風味；對于加工番茄，可溶性固形物含量每增加1％，就相當總產量增加25％，因此培育高可溶性固形物含量的番茄是育種家重要的育種目標之一。但可溶性固形物本身是一個復雜性狀，主要由可溶性糖和有機酸組成，任何與糖和有機酸代謝途徑有關的突變都影響其最終結果，而且可溶性固形物在果實發(fā)育的不同

2、階段的運輸、積累及生理生化代謝過程目前尚不明確，因此急需進行與可溶性固形物含量有關基因的分離與克隆、調節(jié)和控制以及在不同階段的表達等方面的深入研究，為改良番茄品種提高番茄果實品質提供理論依據。 本研究以5種不同可溶性固形物含量的番茄種質為試材，對其不同時期果實的基因差異表達進行分析，在此基礎上，利用RACE技術，對與番茄可溶性固形物相關基因全長cDNA進行克隆。主要結果如下： 1、RNA提取是分子生物學的重要技術之一，番

3、茄果實成分復雜，提取困難，因此改進技術、提高RNA質量，成為番茄果實分子生物學研究的關鍵，經反復比較測試，改進后的RNA提取方法所提取番茄果實RNA質量明顯提高，完全適應于后續(xù)研究的需要。 2、選取110對引物組合，利用cDNA-AFLP的方法對番茄可溶性固形物相關基因進行差異表達分析，檢測到180個在果實膨大期、綠熟期、轉色期和完全成熟期特異表達的TDF，對其中的140個TDF進行了再次擴增、克隆和測序，選取39個與可溶性固形

4、物相關的序列，序列分析表明，32個TDF與己知功能的序列同源同源性較高(E-Value<10<'-10>)，功能涉及合成酶、轉移酶、蛋白激酶以及果實特異蛋白等基因，另有7個TDF無同源序列或同源性低，可能代表新的基因。 3.挑選其中6個有意義的TDF，作為獲得全長基因的侯選TDF，以其為模板設計特異性引物，用RT-PCR法證實這6個基因在果實不同時期均有特異表達。通過快速擴增cDNA末端(rapid amplification