大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育育性恢復(fù)基因的分子標(biāo)記.pdf

1、本研究以西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院白菜組育成的大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系02A<,1>與恢復(fù)材料02S<,149-5>配制的可育F<,1>、F<,2>分離群體為材料，采用分離群體分組分析法(BSA)，進(jìn)行了大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育育性恢復(fù)基因分子標(biāo)記的篩選及連鎖分析。同時(shí)，對(duì)SRAP(Sequence-related amplified polymorphism，序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性)技術(shù)在大白菜分子育種中的應(yīng)用做了探索。主要結(jié)果如下： 1

2、.以大白菜可育分離F<,2>群體為材料，通過花期育性分離分析，證實(shí)大白菜恢復(fù)材料02S<,149-5>對(duì)大白菜pol細(xì)胞質(zhì)雄性不育系02A1育性的恢復(fù)為一對(duì)顯性基因控制。 2.利用F<,2>群體構(gòu)建的可育DNA混合池和不育DNA混合池篩選了400個(gè)10堿基引物，在兩DNA混合池之間有差異條帶的引物用構(gòu)建混合池的單株驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)引物S<,1036>(AAGGCACGAG)擴(kuò)增的分子量為657bp的條帶為大白菜可育株特異標(biāo)記，在不育單

3、株中未擴(kuò)增出。重復(fù)性好。進(jìn)一步用引物S<,1036>對(duì)F<,2>群體進(jìn)行擴(kuò)增，連鎖分析，S<,1036-657>與育性恢復(fù)基因的遺傳距離為8.5cM。 3．回收并對(duì)特異片段S<,1036-657，克隆、測(cè)序。根據(jù)測(cè)得序列，在NCBI上進(jìn)行BLASTn比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與編碼擬南芥和油菜的MYB DNA結(jié)合蛋白的核酸序列的同源性達(dá)87％。 4．以大白菜基因組DNA為模板，通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，從Mg<'2+>、Taq酶、dNTP<,s

4、>、引物、模板5種因素4個(gè)水平對(duì)大白菜SRAP反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，建立了適合于大白菜的SRAP-PCR優(yōu)化反應(yīng)體系，反應(yīng)體積為251μl，Mg<'2+>濃度為3.0mmol/L，dNTP<,s>為0.2mmol/L，Taq酶1.5u，引物為0.21unol/L，模板DNA73.2ng。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，35℃復(fù)性1min，72℃延伸1min，5循環(huán)；94℃變性1min，50℃復(fù)性lmin，72℃延