長鏈非編碼RNA MALAT-1促進胰腺癌細胞惡性表型及機制研究.pdf

1、研究目的:
　　本課題運用生物信息學方法篩選出胰腺癌中高表達的長鏈非編碼RNA，即MALAT-1，研究其在胰腺癌中表達情況;分析MALAT-1表達與胰腺癌臨床病理特征之間的關系;闡明MALAT-1在胰腺癌中的生物學功能及調(diào)控的分子機制。
　　研究內(nèi)容和方法:
　　1.通過分析NCBI GEO公共數(shù)據(jù)庫中胰腺癌表達譜芯片數(shù)據(jù)，篩選出長鏈非編碼RNA MALAT-1在胰腺癌中高表達，并在胰腺癌細胞及組織中進行驗證，同時分析

2、MALAT-1表達與臨床病理特征之間的關系。
　　2.研究MALAT-1在胰腺癌中的生物學功能。構建穩(wěn)定干擾MALAT-1的細胞系，分別在分子、細胞以及模式動物水平研究其對胰腺癌生物學功能的影響，包括腫瘤細胞增殖、細胞周期和凋亡、體外細胞遷移和侵襲，體內(nèi)裸鼠移植瘤生長等，并利用蛋白印跡等方法檢測與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、細胞增殖等密切相關的蛋白表達情況，尋找MALAT-1可能介導的信號通路。
　　3.探討MALAT-1影響胰腺癌細胞干

3、性特征。流式細胞儀檢測干細胞標記物的表達，通過軟瓊脂平板克隆及無血清腫瘤懸浮球培養(yǎng)、體外促血管新生、耐藥能力等實驗研究MALAT-1對胰腺癌干細胞樣特征的影響，利用蛋白印跡等方法檢測胰腺癌自我更新相關分子標記的表達。
　　4.分析MALAT-1促進胰腺癌遷移和侵襲可能的分子機制。利用RNA結合蛋白免疫沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、免疫組化等實驗研究MALAT-1結合PRC2復合體，協(xié)同轉(zhuǎn)錄抑制靶基因表達的機制。
　　研究結果:

4、r>　　1.Real time PCR結果驗證胰腺癌細胞系及組織標本中MALAT-1表達上調(diào);統(tǒng)計分析胰腺癌石蠟組織樣本中MALAT-1表達與臨床病理特征之間的關系，結果發(fā)現(xiàn):MALAT-1高表達與胰腺癌AJCC臨床分期（進展期）、淋巴結轉(zhuǎn)移（發(fā)生轉(zhuǎn)移）以及神經(jīng)浸潤（有浸潤）呈正相關。
　　2.下調(diào)MALAT-1表達可抑制胰腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲，可能的機制包括誘導G2/M細胞周期阻滯、促進凋亡、抑制上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化及基質(zhì)金屬蛋

5、白酶家族成員-1、2、9表達等。
　　3.MALAT-1可能發(fā)揮競爭性內(nèi)源RNA的功能，通過上調(diào)Sox2的表達增強胰腺癌干細胞樣特征，包括軟瓊脂平板克隆及無血清腫瘤懸浮球能力、腫瘤血管生成能力等增加，而吉西他濱藥物敏感性下降。
　　4.PRC2復合體家族成員EZH2促進胰腺癌細胞遷移和侵襲，但不影響細胞增殖、凋亡和周期改變。免疫組織化學染色結果顯示:EZH2、E-cadherin表達與胰腺癌患者的淋巴結轉(zhuǎn)移、AJCC臨床分期

6、密切相關，兩者之間表達呈負相關。EZH2可轉(zhuǎn)錄抑制E-cadherin表達。經(jīng)Cox回歸模型多因素分析發(fā)現(xiàn)，EZH2表達可作為判定胰腺癌患者預后的獨立因素之一。RNA結合蛋白免疫沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀等實驗證實MALAT-1可通過招募結合EZH2，協(xié)同轉(zhuǎn)錄抑制E-cadherin，進而促進胰腺癌的侵襲和遷移。
　　研究結論:
　　高表達長鏈非編碼RNA MALAT-1可顯著促進胰腺癌細胞惡性表型，包括增強胰腺癌細胞干性特征，