抑制性寡脫氧核苷酸對小鼠實驗性肝損傷保護作用及其機制研究.pdf

1、第一章刀豆球蛋白所致實驗性肝損傷模型的構(gòu)建 目的：構(gòu)建ConA誘導(dǎo)的小鼠實驗性肝損傷模型。 方法：Balb/C小鼠40只，分別尾靜脈注射ConA，根據(jù)注射劑量的大小，小鼠被隨機分為4組（每組10只）：A組為10mg/kg，B組為20mg/kg，C組為30mg/kg，另D組作為實驗對照組尾靜脈僅注射生理鹽水。給藥后8h時觀察小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性、死亡率和C組心、肺、腎、腦、肝組織的病理改變。選擇ConA劑

2、量，并觀察此劑量下不同時間點ALT活性、死亡率和肝組織的病理改變特點。 結(jié)果：A組和D組未見小鼠死亡，B組死亡3只小鼠，C組全部死亡。A組和B組ALT活性顯著高于D組。光鏡下A組可見肝細(xì)胞變性，B和C組可見肝組織炎癥細(xì)胞浸潤和肝細(xì)胞變性、壞死，且以C組為甚。C組肺可見輕度充血、腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)輕度空泡變性、而心、腦未見明顯異常。20mg/kgConA尾靜脈注射，小鼠死亡率、ALT活性、肝組織炎癥細(xì)胞浸潤和肝細(xì)胞變性、壞死在一定

3、時間范圍內(nèi)（24h）隨著時間增加而加劇。 結(jié)論：1.成功構(gòu)建了ConA小鼠實驗性肝損傷模型。2.ConA小鼠實驗性肝損傷模型ConA最佳劑量為20mg/kg。 第二章抑制性寡脫氧核苷酸對刀豆球蛋白所致肝損傷保護作用的觀察 第一節(jié)造模前12小時注射抑制性寡脫氧核苷酸對刀豆球蛋白所致肝損傷保護作用的觀察 目的：探討造模前12小時（h）注射抑制性寡脫氧核苷酸（suppressive oligonucleotid

4、es，Sup ODN）對刀豆球蛋白A（ConA）所致小鼠實驗性肝損傷的保護作用。 方法：雌性Balb/C小鼠80只隨機分為生理鹽水（NS）組、環(huán)孢霉素（CsA）組、對照寡脫氧核苷酸（Controloligonucleotides，ConODN）組、SupODN組，每小組又分8h和24h兩個時間點，每個時間點觀察10只小鼠。ConA（20mg/kg）尾靜脈注射小鼠造模。造模前12h時每組分別給予NS（0.3mL/只）、ConODN

5、（20mg/kg）、CsA（130mg/kg）、SupODN（20mg/kg）腹腔給藥。給藥8h和24h時分別觀察小鼠的死亡率；采血檢測血清中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性。RT-PCR檢測肝組織的TNF-α、IFN-γmRNA的表達，同時觀察肝組織的病理改變。 結(jié)果：與NS、ConODN組相比，SupODN組ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表達明顯降低，IL-4含量明顯升高（

6、P<0.01）。與NS和ConODN組相比SupODN組肝細(xì)胞壞死程度和炎癥細(xì)胞浸潤顯著減輕（P<0.05）。 第二節(jié)造模同時注射抑制性寡脫氧核苷酸對ConA所致肝損傷保護作用的觀察 目的：探討造模同時注射SupODN對ConA所致小鼠實驗性肝損傷的保護作用。 方法：雌性Balb/C小鼠80只隨機分為NS組、CsA組、ConODN組、SupODN組，每小組又分8h和24h兩個時間點，每個時間點觀察10只小鼠。Co

7、nA（20mg/kg）尾靜脈注射小鼠造模。造模同時每組分別給予NS（0.3mL/只）、ConODN（20mg/kg）、CsA（130mg/kg）、SupODN（20mg/kg）腹腔給藥。給藥8h和24h時分別觀察小鼠的死亡率；采血檢測血清TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及ALT活性。RT-PCR檢測肝組織的TNF-α、IFN-γmRNA的表達，同時觀察肝組織的病理改變。 結(jié)果：與NS、ConODN組相比，SupODN組ALT

8、活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表達明顯降低，而IL-4含量明顯升高（P<0.01）。與NS和ConODN組相比SupODN組肝細(xì)胞壞死程度和炎癥細(xì)胞浸潤顯著減輕（P<0.05）。 第三節(jié)造模后2小時注射抑制性寡脫氧核苷酸對ConA所致肝損傷保護作用的觀察 目的：探討造模后2h注射SupODN對ConA所致小鼠實驗性肝損傷的保護作用。 方法：雌性Balb/C小鼠80只隨機分為NS、，CsA組、ConODN

9、組、SupODN組，每小組又分8h和24h兩個時間點，每個時間點觀察10只小鼠。ConA（20mg/kg）尾靜脈注射小鼠造模。造模后2h時每組分別給予NS（0.3mL/只），ConODN（20mg/kg），CsA（130mg/kg），SupODN（20mg/kg）。給藥8h和24h時觀察小鼠的死亡率；采血檢測血清TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及ALT活性。RT-PCR檢測肝組織的TNF-α、IFN-γmRNA的表達，同時觀察肝組織

10、的病理改變。 結(jié)果：SupODN與CsA組相比，死亡率明顯降低（P<0.01）。與Ns、ConODN組相比，SupODN組ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表達明顯降低，而IL-4含量明顯升高（P<0.01）。與NS和ConODN組相比SupODN組肝細(xì)胞壞死程度和炎癥細(xì)胞浸潤顯著減輕（P<0.05）。 結(jié)論：SupODN對ConA誘導(dǎo)的小鼠實驗性肝損傷有明顯保護作用。 第三章抑制性寡脫氧核苷酸作用機

11、制的初步探 目的：初步探討抑制性寡脫氧核苷酸（suppressive oligonucleotides，Sup ODN）對刀豆球蛋白A（ConA）所致肝損保護作用的機制。 方法：實驗動物分組、肝損傷模型構(gòu)造及實驗動物給藥同第二章。Westernblot測定脾組織中磷酸化的STAT4（phosphorylated STAT6，pSTAT4）、pSTAT6、T-bet蛋白表達，余指標(biāo)檢測同第二章。 結(jié)果：血清TNF-