熱化療對轉(zhuǎn)CD基因結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的殺傷作用.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文熱化療對轉(zhuǎn)CD基因結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的殺傷作用姓名：李金茂申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：馬慶久賴大年2003.6.1第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文熱化療對轉(zhuǎn)CD基因結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的殺傷作用碩士研究生李金茂導(dǎo)師馬慶久教授賴大年教授指導(dǎo)老師魯建國副教授第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科西安710038中文摘要目的探討溫?zé)岑煼芊裨黾忧八?FC對轉(zhuǎn)CD基因結(jié)腸癌細(xì)胞的靶向性殺傷作用及作用機制。／方法《

2、、脂質(zhì)體法將含CD基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體G1CEACDNa直接轉(zhuǎn)染大腸癌SW480細(xì)胞，PCR分析目的基因整合，RTPCR方法檢測目的基因表達(dá)；將轉(zhuǎn)染G1CEACDNa之SW480細(xì)胞及未轉(zhuǎn)基因之SW480細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種同時加入含各種梯度濃度的前藥5FC，熱療組分別于加入5FC的同時在43“C下熱療30rain，對照組不熱療，第8d去除培養(yǎng)液，以MTT法測定活細(xì)胞比率并計算殺傷率，分析前藥熱療對轉(zhuǎn)基因腫瘤細(xì)胞的殺傷作用

3、。此外，分別于加入5FC的同時在41℃、42℃、43“(2、44℃、45“(2、60。C下熱療30rain，以及在加入5FC的同時在43“C下熱療10rain、20min、30min、40min、50min、lh，以探討前藥5FC的最適溫度與時間。流式細(xì)胞術(shù)分析熱化療對腫瘤細(xì)胞周期的影響，透射電鏡觀測熱化療前后腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果脂質(zhì)體法成功將G1CEACDNa轉(zhuǎn)染入大腸癌SW480細(xì)胞，PCR檢測表明目的基因整合到靶細(xì)胞中，RTP