丹酚酸A對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)選用血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)VSMCs增殖，旨在觀察SA-A對(duì)大鼠VSMCs增殖抑制作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。為今后SA-A預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化性疾病提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)組織貼塊法培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞( rat aortic smooth muscle cell，RASMCs)，建立RASMCs體外培養(yǎng)模型，在倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察并對(duì)培養(yǎng)的3～5代細(xì)胞

2、進(jìn)行平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(SM-αactin)免疫組化鑒定。
　　 (2)實(shí)驗(yàn)分為：正常對(duì)照組、AngⅡ組、丹酚酸A組、AngⅡ+丹酚酸A濃度梯度組。
　　 (3)噻唑藍(lán)(MTT)比色法觀察細(xì)胞增殖情況，免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)測(cè)定p-Src，p-Akt(308)，p-Akt(473)激酶活化情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)原代培養(yǎng)的VSMCs生長(zhǎng)良好，光鏡下呈長(zhǎng)梭形及“峰與谷”樣生長(zhǎng)。S

3、Mα-actin免疫組化的結(jié)果顯示培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的VSMCs特征。
　　 (2)MTT結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，AngⅡ能明顯促進(jìn)VSMCs的增殖。與對(duì)照組相比，單用SA-A使VSMCs數(shù)量減少。AngⅡ促進(jìn)VSMCs增殖的作用能被SA-A所抑制，并且SA-A呈濃度依賴性抑制VSMCs增殖，以100μM作用最為顯著。
　　 (3)Western blot結(jié)果顯示給藥組p-Src蛋白表達(dá)明顯低于同時(shí)間點(diǎn)的AngⅡ組，丹酚酸

4、A能顯著抑制p-Src的活化。
　　 (4)Western blot結(jié)果顯示給藥組p-Akt308，p-Akt473蛋白表達(dá)明顯低于同時(shí)間點(diǎn)的AngⅡ組，SA-A可明顯降低Akt磷酸化水平，并且SA-A降低Akt的磷酸化水平呈濃度依賴性。
　　 結(jié)論：
　　 (1)SA-A呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導(dǎo)VSMCs的增殖。
　　 (2)SA-A通過降低p-Src的活化及削弱Akt活化，發(fā)揮抗AngⅡ誘導(dǎo)VSM