LOX-1-PPARγ在ox-LDL誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性分子表達(dá)中的作用.pdf

1、本研究的目的在于探討LOX-1是否介導(dǎo)ox-LDL上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌粘附分子和趨化因子;再此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討LOX-1/PPARγ信號途徑在ox-LDL誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)中的作用.研究方法:1、LOX-1與ox-LDL結(jié)合并介導(dǎo)對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷用胰酶灌注消化法分離并原代培養(yǎng)HUVECs,并從細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、人第Ⅷ因子相關(guān)抗原以及透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)等方面對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定.2、Ox-LDL誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)LOX-1用

2、n-LDL、polyinosonic acid、carrangeenan以及不同濃度的ox-LDL處理培養(yǎng)的HUVECs,用Realtime RT-PCR測定LOX-1 mRNA的表達(dá)水平,用Western blot測定LOX-1蛋白表達(dá)水平,觀察ox-LDL對HUVECs表達(dá)LOX-1的影響以及LOX-1在ox-LDL誘導(dǎo)其自身表達(dá)中所起的作用.3、Ox-LDL通過LOX-1誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞趨化因子和粘附分子的表達(dá)用不同濃度ox-LD

3、L培養(yǎng)HUVECs,用RT-PCR測定MCP-1、ICAM-1、VCAM-1以及E-selectin的mRNA表達(dá);用Western blot測定MCP-1、ICAM-1、VCAM-1以及E-selectin蛋白的表達(dá),觀察ox-LDL對血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子和趨化因子表達(dá)的影響.4、PPARγ在ox-LDL通過LOX-1上調(diào)粘附分子表達(dá)中的作用用不同濃度ox-LDL處理培養(yǎng)的HUVECs;或HUVECs預(yù)先用polyinosonic a

4、cid和carrangeenan處理,再用ox-LDL培養(yǎng),分別用Realtime RT-PCR和Western blot測定PPARγ的表達(dá),觀察ox-LDL對HUVECs PPARγ表達(dá)的影響.分別單獨(dú)使用polyinosonic acid和1 5d-PGJ2、或聯(lián)合使用polyinosonic acid和15d-PGJ2預(yù)先培養(yǎng)HUVECs,再用ox-LDL培養(yǎng),分別用RT-PCR和Western blot測定ICAM-1、E-s