腺相關及腺病毒內耳基因轉染和Rb敲除結合ISL1表達誘導小鼠毛細胞與支持細胞增殖.pdf

1、復旦大學博士學位論文腺相關及腺病毒內耳基因轉染和Rb敲除結合ISL1表達誘導小鼠毛細胞與支持細胞增殖姓名：舒易來申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：王正敏20120410復旦大學博士論文Rbl并過表達內耳前體細胞基因ISLI誘導新生及成年小鼠耳蝸毛細胞與支持細胞的增殖的研究。第一部分：5型腺病毒經中階路徑注射轉染新生和成年小鼠耳蝸毛細胞和支持細胞的評價【目的】為了研究5型腺病毒攜帶目的基因經新生和成年小鼠中階入路導入轉染內耳細

2、胞的可行性，為以小鼠為動物模型的內耳基因治療提供實驗基礎和解剖學依據【方法】采用納升級顯微操作系統(tǒng)，經中階顯微注射攜帶增強型綠色熒光蛋白(EnhancedGreenFluorescentProteinEGFP)基因的5型重組腺病毒或人工內淋巴液于各年齡段的小鼠耳蝸(pl，p4，p7，p12，p21，卜2M)，內耳注射4天后取雙側耳蝸標本做基底膜鋪片，觀察EGFP表達情況。【結果】p1、P4、P7組：術后第4天見耳蝸底圈、中圈支持細胞表達

3、GFP。p12、p21、I2M組：術后第4天可見耳蝸底圈、中圈支持細胞及部分內毛細胞表達EGFP。在人工內淋巴液和未注射耳，未見EGFP表達。【結論】采用經中階入路顯微注射5型腺病毒攜帶目的基因導入新生鼠及成年鼠能夠將目的基因成功轉染至耳蝸組織并表達。第二部分：12種腺相關病毒經中階路徑注射轉染新生和成年小鼠耳蝸毛細胞和支持細胞的比較【目的】為了比較12種腺相關病毒攜帶目的基因經新生和成年小鼠中階入路導入內耳的可行性，尋找新的更安全的載