獨(dú)一味顆粒對(duì)肝纖維化大鼠肝組織TGF-β1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本課題是在前期實(shí)驗(yàn)的研究基礎(chǔ)上，通過(guò)觀察獨(dú)一味顆粒對(duì)肝纖維化模型大鼠肝組織TGF-β1表達(dá)的影響，探討?yīng)氁晃额w?？估w維化的作用機(jī)理，拓展獨(dú)一味的臨床應(yīng)用空間，為臨床提供理論支持。
　　方法：將78只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組、獨(dú)一味高、中、低劑量組，共6組，每組13只。采用皮下注射CCl4油劑（首劑5ml/kg，其后3ml/kg）聯(lián)合高脂飼料的復(fù)合法，綜合誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，空白對(duì)照組注射等量橄欖

2、油，均為每3天1次，連續(xù)8周。自實(shí)驗(yàn)第一天開(kāi)始，秋水仙堿組給藥（0.045 g/kg）灌胃，獨(dú)一味治療組分別給予高（2.4g/kg）、中（1.2g/kg）、低（0.6g/kg）三種劑量獨(dú)一味顆粒溶液灌胃，模型組和空白對(duì)照組予等量的生理鹽水，至第8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，全部大鼠采取股動(dòng)脈放血處死，離心分離血清，放射免疫法測(cè)定血清中透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)、層粘連蛋白(Laminin，LN)、III型前膠原(procoll

3、agen type III，PCIII)及IV型膠原(collagen-IV，IV-C)的含量。取肝最大葉相同部位1cm×1cm×0.5cm大小的肝組織，置于10％甲醛緩沖液中固定，石蠟包埋切片，常規(guī)HE及Masson染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織形態(tài)和纖維增生等情況，免疫組化測(cè)定肝組織中TGF-β1蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)檢測(cè)肝組織TGF-β1mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：①血清HA、LN、PCIII、Ⅳ-C含量：與空白對(duì)照組比較

4、，模型組大鼠血清肝纖指標(biāo)均顯著升高(p<0.01)；與模型組的比較，各給藥組均能顯著降低大鼠血清的HA、LN、PCIII、Ⅳ-C含量(p<0.01)；與秋水仙堿組比較，獨(dú)一味治療組在LN、PCIII差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　?、诟谓M織病理形態(tài)學(xué)顯示：空白組肝組織胞質(zhì)豐富，匯管區(qū)未見(jiàn)炎細(xì)胞滲出及纖維組織異常增生；與空白組比較，模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，肝組織中有炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，大部分的標(biāo)本可見(jiàn)程度、范圍不等的肝細(xì)胞壞

5、死肝細(xì)胞廣泛的脂肪變性；與模型組比較，秋水仙堿組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，細(xì)胞變性壞死的明顯減輕，僅匯管區(qū)少量的膠原沉積，無(wú)明顯纖維間隔的形成；而獨(dú)一味各組的肝小葉結(jié)構(gòu)存在，排列欠整齊，可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，程度較模型組減輕，纖維增生的不明顯。
　?、鄞笫蟾谓M織 TGF-β1免疫組化顯示：空白對(duì)照組大鼠肝組織中可見(jiàn)少量TGF-β1基礎(chǔ)性表達(dá)，存在于肝組織的間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)；模型組大鼠肝組織中TGF-β1表達(dá)明顯增強(qiáng)，數(shù)目增多，呈棕黃色胞漿型

6、分布；各給藥組大鼠肝組織中TGF-β1在匯管區(qū)及纖維間隔中有少量表達(dá)，陽(yáng)性染色程度較模型組明顯減輕。
　　④大鼠肝組織 TGF-β1mRNA表達(dá)水平：與空白對(duì)照組相比較，模型組大鼠肝組織 TGF-β1mRNA的表達(dá)明顯較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），與模型組相比較，各用藥組大鼠肝組織 TGF-β1mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），且獨(dú)一味高劑量組優(yōu)于秋水仙堿組。
　　結(jié)論：獨(dú)一味顆?？梢燥@著降低肝纖維