扶正解毒含藥血清對鎳致癌干預作用的細胞分子機制研究.pdf

1、蘭州大學博士學位論文扶正解毒含藥血清對鎳致癌干預作用的細胞分子機制研究姓名：王婷申請學位級別：博士專業(yè)：中西醫(yī)結合臨床指導教師：朱玉真20100601量。2 ．將1 6 H B E 細胞接種于2 5 m l 培養(yǎng)瓶中，每孔接種的細胞數(shù)為6 x 1 0 6 ，培養(yǎng)2 4 h 后，用N i S ( 1 ．5 ．0 1 u n o l ／L ) 染毒，并用無菌的M E M 、N i S ( 2 ．0 1 1 m o l ／L ) + 不同劑量

2、F J D 含藥血清、空白血清、以及三種抑制劑，磷酸化P 3 8 絲裂原活化蛋白激酶( P 3 8 1 腳K ) 、磷酸化細胞外信號調節(jié)蛋白激酶( P ．E R K ) 、磷酸化氨基未端蛋白激酶( P ．玳K ) 處理細胞2 4 h ，無菌P B S 洗滌細胞2 次，胰酶消化后制成細胞懸液，用聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白免疫印跡雜交( W e s t e r n b l o t ) 法觀察各組細胞中磷酸化E R K 、P 3 8 和J N

3、K 的表達。3 ．將1 6 H B E 細胞用無菌的M E M 、不同濃度的N i S ( 1 ．0 - 4 ．0 1 u n o l ／L ) 、N i S ( 2 ．0 I - z m o l ／L ) + F J D 含藥血清( 低、中、高劑量組) 處理細胞2 4 h 后，用免疫組化法檢測各組細胞中核轉錄因子( N F ．1 c B )r B 的活性，并進行半定量分析，用R T ．P C R 法測定支氣管上皮細胞中N F ．r ．

4、B P 6 5的表達。本次實驗采用S P S S l 3 ．0 統(tǒng)計軟件進行相關分析，多組間比較采用方差分析，兩組之間的比較采用T 檢驗，P < 0 ．0 5 被認為有統(tǒng)計學意義。結果1 ．當N i S 的濃度為1 - 8 9 m o l ／L 時，細胞的存活率均低于陰性對照組( M E M 培養(yǎng)液) ，且N i S 的濃度越高。細胞存活率越低，分別為9 3 ．6 ％、9 2 ．8 ％、9 0 ．3 ％、7 0 ．3 ％；低、中、

5、高劑量F J D 含藥血清和空白血清對1 6 H B E 細胞均無毒性，細胞存活率分別為9 9 ．1 ％、9 8 ．8 ％、9 9 ．5 5 ％、9 8 ．7 ％。2 ．N i S 能明顯激活細胞R O S 、M D A 的表達( 氏0 ．0 5 ) ，N i S 的濃度分別為1 ．0 、2 ．0 、4 ．0 1 9 n o l ／L 時，1 6 H B E 細胞中R O S 分別為3 1 ．6 8 、3 3 ．2 1 、3 5 ．2

6、6 U ／¨，且存在劑量一效應關系( r - - 0 ．8 1 3 ) ；1 6 H B E 細胞中M D A 分別為0 ．9 5 1 8 、1 ．0 5 0 3 、1 ．1 6 2 0n m o l ／m l ，且存在劑量一效應關系( r - - 0 ．7 9 2 6 ) 。低、中、高劑量F J D 血清與N i S ( 2 1 a n o l ／L ) 共同處理1 6 H B E 細胞，R O S 、M D A 活性均低于

7、染鎳組( N i S 為2 1 m a o l ／L ) ，尤其中、高劑量血清組作用顯著( P < o ．0 5 ) ，空白血清對1 6 H B E 細胞中R O S 、M D A 沒有影響。N i S 能明顯抑制S O D 、G S H ．P x 的活性( 氏0 ．0 5 ) ，N i S 的濃度分別為1 ．O 、2 ．0 、4 ．0 9 m o l ／L時，1 6 H B E 細胞中S O D 分別為1 1 ．9 9 、7 ．

8、8 9 、5 ．2 4N U ／m l ，且存在劑量一效應關系( F 0 ．8 7 5 ) ；同時1 6 H B E 細胞中G S H ．P x 分別為2 2 ．6 5 、1 5 ．7 5 、1 0 ．3 8 U ／m l ，且存在劑量一效應關系( 間．8 2 9 ) 。低j 中、高劑量F J D 血清與N i S ( 2 9 m o l ／L )共同處理1 6 H B E 細胞中，S O D 、G S H - P x 活性均高于染鎳組