功勞木的抗腫瘤作用及其機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：從中藥功勞木提取物中篩選具有抗腫瘤作用的活性成分，并探討活性成分的抗腫瘤作用機制。
　　 方法：采用MTT(3-(4，5-Dimethythiazol-2-y1)-2,5-diphenyl-te-trazoliumbromide)法檢測功勞木提取物對人白血病K562細胞的增殖抑制作用，篩選抗腫瘤活性成分。通過吖啶橙/溴乙啶(Acridine orange/Ethidium BromideAO/EB)雙染法觀察細胞形態(tài)學變化

2、，羅丹明123(Rhodamine，Rh123)/Hoechst33342檢測細胞線粒體膜電位的變化，采用DCFH-DA/Hoechst33342熒光法結合高內(nèi)涵活細胞成像系統(tǒng)檢測細胞內(nèi)氧自由基水平，以檢測功勞木活性成分K562細胞凋亡的影響。提取兔腦微管蛋白采用比濁發(fā)檢測功勞木活性成分對微管蛋白聚合-解聚的影響。
　　 結果：從功勞木提取物中篩選出兩種抗腫瘤活性成分，分別為藥根堿和小檗堿，其對K562細胞作用48h的IC50分

3、別為30.47μg/ml，15.36μ/ml。藥根堿、小檗堿作用K562細胞36h后，在形態(tài)學上呈現(xiàn)明顯的細胞凋亡特征，且細胞內(nèi)氧自由基水平明顯增加，細胞內(nèi)線粒體膜電位明顯降低，均呈濃度依賴性。體外兔腦微管蛋白聚合-解聚分析表明，藥根堿和小檗堿均能抑制微管蛋白的聚合，且藥根堿作用強于小檗堿。
　　 結論：從功勞木中提取的藥根堿和小檗堿對K562細胞生長具有明顯的增殖抑制作用并可誘導其凋亡。藥根堿和小檗堿可能通過阻礙線粒體內(nèi)信號傳

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