彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤基因表達(dá)譜分析及分子分型相關(guān)預(yù)后研究.pdf

1、[目的] 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)具有明顯的異質(zhì)性，病人之間生存情況差異顯著。依賴臨床參數(shù)的國(guó)際預(yù)后指數(shù)不能準(zhǔn)確評(píng)價(jià)預(yù)后，從分子水平研究DLBCL生物學(xué)特性是揭示疾病本質(zhì)、正確評(píng)估預(yù)后的主要途徑。本研究擬通過寡核苷酸芯片、免疫組織化學(xué)以及單克隆抗體等技術(shù)，分析DLBCL基因表達(dá)譜，對(duì)其進(jìn)行分子分型并篩選出亞型特異的靶基因；探討以免疫組織化學(xué)為基礎(chǔ)的分子分型與預(yù)后的關(guān)系；制備分子分型靶點(diǎn)CD10單克隆抗體，以供免疫組化使用。

2、 [方法] 采用Affymetrix寡核苷酸芯片檢測(cè)10例DLBCL的基因表達(dá)譜情況，根據(jù)71個(gè)基因?qū)?0例DLBCL進(jìn)行分子分型，然后利用SAM分析篩選亞型特異的靶基因。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)57例DLBCL標(biāo)本中CD10、Bcl-6和MUM1的表達(dá)情況，據(jù)此對(duì)DLBCL進(jìn)行分子分型，并結(jié)合病人的生存情況分析不同亞型與預(yù)后的關(guān)系。通過載體構(gòu)建、蛋白質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)、蛋白質(zhì)純化、細(xì)胞融合、克隆化等技術(shù)，篩選表達(dá)抗人CD10單克隆抗體的雜交

3、瘤細(xì)胞株，并制備和純化抗人CD10單克隆抗體。 [結(jié)果] 10例進(jìn)行表達(dá)譜分析的DLBCL中，3例為GCB型，6例為ABC型，1例為Type3；篩選出94個(gè)亞型特異性靶基因，其中12個(gè)基因在ABC型表達(dá)上調(diào)而在GCB中表達(dá)下調(diào)，82個(gè)基因在GCB型表達(dá)上調(diào)而在ABC中表達(dá)下調(diào)。57例DLBCL預(yù)后分析結(jié)果：GCB型接受CHOP治療的患者與GCB型接受R-CHOP治療的患者完全緩解率(CR)、總生存率(OS)和無進(jìn)展生存率(PFS

4、)均無明顯差別(CR: P=1.0000, OS: P=0.2933, PFS: P=0.1681)；GCB型接受CHOP治療的患者的完全緩解率、總生存率和無進(jìn)展生存率均明顯優(yōu)于non-GCB型接受CHOP治療的患者(CR: P=0.0407, OS: P=0.0037, PFS: P=0.0017)；GCB型接受R-CHOP治療的患者與non-GCB型接受R-CHOP治療的患者完全緩解率、無進(jìn)展生存率無明顯差別(CR: P=0.335

5、9, PFS: P=0.0891)，而在總生存率上non-GCB型接受R-CHOP治療的患者較低(OS: P=0.0326)。篩選出兩株穩(wěn)定分泌抗人CD10單克隆抗體的細(xì)胞株，制備并純化出IgG型抗人CD10單克隆抗體。 [結(jié)論] 利用基因芯片可以從全基因組水平研究DLBCL的基因表達(dá)情況，對(duì)DLBCL進(jìn)行分子分型，其高通量的特點(diǎn)使得從成千上萬個(gè)基因中篩選具有特殊意義的靶基因成為可能?；趥鹘y(tǒng)的CHOP方案，GCB型的完全緩解率