兩種重要新型魚類病毒（SGIV和SVCV-A1）基因組與部分功能基因的研究.pdf

1、新加坡石斑魚虹彩病毒(Singapore grouper：iridovirus，SGIV)和鯉春病毒血癥病毒亞洲I型(Spring viraemia ofcarp virus-Asia 1，SVCV-A1)是近年來新出現(xiàn)的兩種嚴重的魚類傳染性病毒，可以感染多種經濟魚類，致使魚類大面積死亡，造成了巨大的經濟損失。目前尚不清楚這兩種病毒感染和致病的分子機理，缺乏有效的辦法對病毒進行防治。因此，在基因和分子水平上研究這兩種病毒顯得尤為必要。

2、 (一)SGIV轉錄組學本論文根據(jù)全基因組序列信息，成功構建了包含SGIV 162個ORFs在內的全基因組DNA芯片，并運用DNA microarray技術完成了SGIV體外感染石斑魚脾細胞(GS)和體內感染石斑魚脾組織的轉錄圖譜，初步界定出SGIV三類不同表達時相的轉錄本。此后，采用Real-time RT-PCR、RT-PCR和dilution RT-PCR等技術驗證了芯片數(shù)據(jù)的可靠性和可重復性。研究表明：絕大部分基因在體外感

3、染48小時和體內感染4天時高表達；SGIV基因在體內體外感染過程中的轉錄模式有很大的差異，體內感染的轉錄模式更為復雜，可能是受到了宿主抗病毒免疫系統(tǒng)的作用；共有15個極早期(IE)、89個早期(E)和53個晚期(L)轉錄本得到了界定；在體外培養(yǎng)細胞中，病毒的復制周期約為48小時；在魚體感染組織中，宿主可能主要通過抑制與病毒復制有關的E期轉錄本來破壞病毒的復制機制，從而產生免疫清除效應。 (二)SGIV誘導的細胞凋亡在SGIv轉錄

4、組學研究的基礎上，對SGIv誘導的宿主細胞凋亡進行了較系統(tǒng)的研究。結果發(fā)現(xiàn)，SGIv誘導的細胞凋亡具有時間依賴性、病毒感染強度依賴性和細胞特異性。凋亡的發(fā)生無需病毒的復制，但病毒編碼的與凋亡相關的蛋白起著重要的調控作用。通過對病毒card(Caspase activation and recruitment domain)和bak基因功能的研究發(fā)現(xiàn)，外源性card或bak基因過表達后都能誘發(fā)細胞凋亡，且這兩種基因可能通過Caspase-

5、9協(xié)同作用。中和實驗表明，CA：RD蛋白可能發(fā)揮免疫逃避作用，有利于病毒的復制和增殖。RNAi實驗表明，siRNA可以通過特異性地抑制bak基因而部分地抑制由病毒引起的細胞凋亡，但不能抑制細胞凋亡的發(fā)生，且對病毒的復制和增殖無顯著影響。 (三)SVCV-A1全基因組序列分析首次完成了SVCV-A1全基因組序列的測定、基因詮釋和分析。通過遺傳進化分析，證實了SVCV-A1是彈狀病毒科水泡病毒屬的新成員，屬于SVCV的Ia亞群。