鎂黃長(zhǎng)石促進(jìn)脂肪干細(xì)胞成骨分化的機(jī)制研究.pdf

1、目的：鈣-硅基生物陶瓷材料鎂黃長(zhǎng)石具有良好的細(xì)胞相容性，可以促進(jìn)人脂肪干細(xì)胞（human Adipose-Derived Stem Cells，hASCs）體外成骨分化。本實(shí)驗(yàn)探討了鎂黃長(zhǎng)石浸提液對(duì)hASCs體外增殖和成骨分化的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行研究。
　　 方法：以不同稀釋濃度鎂黃長(zhǎng)石浸提液對(duì)第三代hASCs進(jìn)行體外培養(yǎng)，LG-DMEM作為對(duì)照。（1）溶膠-凝膠法制備鈣鎂黃長(zhǎng)石粉體，依據(jù)ISO_10993-5制備鈣鎂黃長(zhǎng)石浸

2、提液，以電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜（ICP）技術(shù)檢測(cè)體浸提液中Ca，Mg，Si離子濃度，LG-DMEM稀釋為不同濃度。（2）DNA法檢測(cè)不同稀釋濃度浸提液對(duì)hASCs的增殖情況影響，LDH Release及Live/Dead Double Staining檢測(cè)不同稀釋濃度浸提液對(duì)hASCs的細(xì)胞毒性（LG-DMEM設(shè)為對(duì)照），流式細(xì)胞周期分析檢測(cè)不同濃度浸提液對(duì)細(xì)胞周期的影響。（3）定性和定量方法分別檢測(cè) 堿性磷酸酶（Alkalin

3、e Phosphatase，ALP）、細(xì)胞外鈣鹽沉積情況，Real-time PCR測(cè)定生長(zhǎng)于不同稀釋濃度浸提液中的hASCs成骨相關(guān)基因表達(dá)。（4）Western-Blot 檢測(cè)MAPK家族不同通路激活情況。以梯度濃度的PD98059特異性阻斷ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，驗(yàn)證其調(diào)控hASCs成骨分化的作用。
　　 結(jié)果：在體外培養(yǎng)條件下，鎂黃長(zhǎng)石浸提液對(duì)hASCs的增殖具有濃度依賴(lài)性的抑制作用，1/2濃度抑制作用最明顯。浸提液對(duì)hAS

4、Cs沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性，但可以抑制hASCs的分裂。鎂黃長(zhǎng)石浸提液可以濃度依賴(lài)性地促進(jìn)hASCs的成骨分化，這種促進(jìn)作用在1/4濃度時(shí)最明顯。成骨誘導(dǎo)條件下，hASCs的ERK激活最早出現(xiàn)于5min，30min時(shí)達(dá)到高峰，60min時(shí)下降到基線(xiàn)水平。1/4濃度浸提液促進(jìn)ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活程度最強(qiáng)，PD98059能夠濃度依賴(lài)性地阻斷浸提液對(duì)hASCs成骨分化的促進(jìn)作用。
　　 結(jié)論：鎂黃長(zhǎng)石浸提液對(duì)hASCs沒(méi)有顯著的細(xì)胞毒性