抗人可溶性間皮素相關蛋白單克隆抗體的制備及特性鑒定.pdf

1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文抗人可溶性間皮素相關蛋白單克隆抗體的制備及特性鑒定姓名：劉雅坤申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學指導教師：吳小華;單保恩20070301中文摘要克隆抗體( m A b ) ，并對其生物學特異性進行了鑒定。方法：1 應用G O L D K E Y 軟件對從N C B I 蛋白質數(shù)據(jù)庫中調出人M S L N 氨基酸序列進行分析，對M S L N 的H o p p &W o o d s 親水性參數(shù)、抗原性參數(shù)、可

2、及性參數(shù)、B 一轉角等多參數(shù)分別進行預測，然后用吳氏法進行綜合分析其準確性。2 抗S M R 抗體的制備應用方法1 選取的S M R 抗原表位的氨基酸序列，合成多肽抗原，免疫B A L B ／c 小鼠，取脾細胞與S P 2 ／O 小鼠骨髓瘤細胞融合后，選出抗S M R 抗原表位的陽性克隆，再進行亞克隆，將穩(wěn)定分泌抗S M R 抗原表位單克隆抗體的細胞株進行擴大培養(yǎng)?？贵w效價用E L I S A 法檢測。取～定量雜交瘤細胞給B A L B

3、 ／c 小鼠腹腔注射，約兩周后收集腹水，得到高效價抗S M R 抗原表位的I g G ，應用免疫細胞化學、S D S ．P A G E 和W e s t e r nb l o t 分析等方法對抗體進行特異性鑒定。3 m A b 的效價、亞類及特異性鑒定3 ．1 效價測定：利用S M R 復合肽抗原( 1 ／M g ／m L ) 1 ：10 0 0 稀釋包被微孔板，利用E L I S A 法檢測腹水抗體效價。3 ．2 抗體亞類測定：用m

4、A b 亞類分型試劑盒，按試劑盒說明書操作。用P H 7 ．2 ．7 ．6P B S 稀釋鼠抗S M R 單克隆抗體，稀釋度為1 ：2 0 0 0 0 。取1 5 吮l 稀釋好的S M R 單克隆抗體放入試管中，混勻，室溫孵育3 0 分鐘。試管中插入試劑條反應5 分鐘，觀察結果。3 ．3 特異性鑒定：( 1 ) 免疫細胞化學( S P ) 法檢測單克隆抗體與問皮素陽性卵巢癌細胞表面天然蛋白反應性。蓋玻片常規(guī)浸酸、沖洗、高壓滅菌后，放置于