CD133分子在兒童B系急性淋巴細胞白血病表達的意義及其生物學特性的初步研究.pdf

1、一、兒童B系急性淋巴細胞白血病CD133分子表達的意義
　　 目的：探討急性淋巴細胞性白血病(AcutelymphoblasticleukemiaALL)患兒誘導化療前后骨髓單個核細胞CD133-1、CD133-2兩種分子的表達與臨床預后指標的相關性。
　　 方法：選取初診ALL患兒59例，流式細胞術檢測其骨髓單個核細胞CD133-1和CD133-2的表達比例。
　　 結果：1）初診B-ALL患幾CD133-1、

2、CD133-2的表達與其年齡、性別、外周血白細胞計數、骨髓幼稚細胞比例、LDH水平、細胞遺傳學改變、融合基因、危險等級、完全緩解(CR)率及白細胞分化抗原CD38、CD58和CD66c等表達均無相關性(P＞0.05)（其中4例T-ALL因例數太少，無統(tǒng)計學意義）。2）55例B-ALL中，CD133-1表達陽性者21例（占38.2％），CD133-2表達陽性30例（占54.5%），二者表達陽性比例有顯著差異(P＜0.05)。3)B-ALL

3、組CD133兩種亞型分子的表達與CD34表達雖然有顯著性差異(P＜0.05)，但無相關性(P＞0.05)；
　　 結論：1）初診B-ALL患兒CD133-1、CD133-2的表達與其性別、年齡、外周血白細胞計數、骨髓幼稚細胞比例、LDH水平、危險等級、融合基因、細胞遺傳學改變、CR率、CD38、CD58、及CD66c等表達均無相關性。2）B-ALL患兒CD133-2的表達比例明顯高于CD133-1。3）CD133表達與CD34表

4、達無相關性。
　　 二、兒童B系ALL來源的CD133+細胞生物學特性的初步研究
　　 目的：體外分離兒童B-ALL原代白血病細胞CD133+CD19+、CD133+CD19-等亞群細胞，初步探討其體外生物學特性。
　　 方法：選取4例CD133表達陽性的B-ALL患兒，經免疫磁珠法(MACS)分選出CD133+CD19+與CD133+CD19-細胞，并用流式細胞儀對所分選細胞的CD133-2表達進行鑒定；分選后

5、的CD133+CD19+與CD133+CD19-兩組亞群細胞，分別接種于含干細胞因子(SCF)、白細胞介素-3(IL-3)和白細胞介素-7(IL-7)的無血清培養(yǎng)基中，懸浮培養(yǎng)4-7周后，流式細胞術檢測培養(yǎng)細胞的CD133、CD19及CD34的表達，RT-PCR檢測其融合基因的表達。同時以MACS分選的CD133-細胞作對照。
　　 結果：1）MACS法分選B-ALL原代白血病CD133+CD19+與CD133+CD19-兩組亞

6、群細胞，分選后細胞總回收數為（76.9±25.63）×106，較分選前細胞總數[（99.0±21.07）×106]低，細胞總回收率為77.7%，但二者之間無顯著差異(P＞0.05)；流式細胞術檢測所分選的細胞的CD133-2表達比例，示兩者平均比例分別為(77.5±13.61)%、(76.83±5.58)%。2）CD133+CD19+、CD133+CD19-兩組亞群細胞在無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)平均5周（4-7周），細胞生長良好，可形成克

7、隆細胞球；通過在4個不同時間點（d0、d14、d28、培養(yǎng)結束前）對兩組細胞進行計數，提示CD133+CD19+亞群細胞增殖速度更快，且培養(yǎng)至14天左右細胞即進入增殖高峰期，上述4個時間點細胞數差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而CD133-CD19+、CD133-CD19-兩組原代細胞亞群則未形成克隆細胞球，且細胞增殖緩慢，1周內無明顯細胞增殖，以后逐漸凋亡。3）CD133+CD19+、CD133+CD19-兩組亞群細胞經體外無血清培

8、養(yǎng)4-7周后，經流式細胞術檢測，CD133、CD19及CD34均無表達。4）2例初診時有融合基因表達異常（分別TEL/AML1、MLL/AF4表達陽性）的B-ALL患兒，分別經無血清培養(yǎng)5、7周后融合基因仍表達陽性。
　　 結論：1）免疫磁珠分選技術能夠成功分離純化兒童B-ALL中CD19+CD133+與CD133+CD19-兩組亞群細胞；2）含不同細胞因子的無血清培養(yǎng)基能有效支持B-ALL的CD133+細胞體外中、長期培養(yǎng)并維