稻瘟菌中富含半胱氨酸小分泌蛋白可視化定位與功能分析.pdf

1、病原真菌需要通過分泌毒力因子來侵染寄主。最新的研究發(fā)現(xiàn)，真菌將效應(yīng)子蛋白分泌到一個(gè)可能會(huì)抑制寄主的防御機(jī)制并促進(jìn)菌體在植物細(xì)胞之間定殖的膜復(fù)合體上，然后將其轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)植物活細(xì)胞。Ebbole教授通過比對稻瘟病菌物種綜合的基因組，從氨基酸大小為180的高半胱氨酸含量蛋白家族中鑒定出了一個(gè)新的蛋白家族，并將其暫命名為稻瘟病菌富含半胱氨酸小分泌蛋白(MoSCRiS)家族。在不同菌株中，大多數(shù)旁系同源蛋白序列存在增加、丟失、閱讀框移碼和提前的終止密

2、碼等現(xiàn)象，揭示了這個(gè)蛋白家族成員基因序列的多樣性。
　　本實(shí)驗(yàn)通過半定量PCR檢測了該蛋白家族成員在不同階段的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)該家族成員在侵染階段存在差異表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)以此為依據(jù)將該家族成員作為候選的效應(yīng)子來研究。以Rp27啟動(dòng)子表達(dá)櫻桃紅熒光蛋白為對照，Rp27啟動(dòng)子表達(dá)的帶櫻桃紅熒光蛋白標(biāo)簽的MoSCRiS1在附著胞、孢子、菌絲和侵染階段均有表達(dá)且與對照有著明顯差異。MoSCRiS1的過量表達(dá)還呈現(xiàn)出在不同寄主上的定位與致病性差異

3、。MoSCRiS2和已知的無毒效應(yīng)子類似，優(yōu)先定位于活體營養(yǎng)界面復(fù)合體（BICs），雖然MoSCRiS3、MoSCRiS5和MoSCRiS6與MoSCRiS2有著相同的定位，但是表達(dá)量都不高，熒光信號(hào)不強(qiáng)。MoSCRiS4則定位于菌絲近細(xì)胞壁的穿越點(diǎn)。大部分家族成員的融合表達(dá)沒有檢測到熒光信號(hào)且敲除也沒有明顯的表型。MoSCRiS1與MoSCRiS2瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果顯示這兩個(gè)基因的表達(dá)不會(huì)引起水稻原生質(zhì)體凋亡，MoSCRiS1具有一段植物定