人骨髓間充質干細胞體外向內皮細胞誘導分化及內皮樣細胞的特性研究.pdf

1、目的：通過研究在體外經化學誘導劑對人大隱靜脈來源的血管內皮細胞和骨髓間充質干細胞進行分離并向內皮細胞分化培養(yǎng)，比較兩種來源內皮細胞的生物學特性及細胞功能，分析作為種子細胞的可行性，為將來組織工程中的應用提供一定的研究基礎。
　　 材料：在無菌狀態(tài)抽取該科手術患者胸骨骨髓10ml；取CABG術中剩余的大隱靜脈段。
　　 方法：采用膠原酶消化法在體外分離培養(yǎng)大隱靜脈血管內皮細胞(hECs)；用密度梯度離心法分離培養(yǎng)人骨髓間充

2、質干細胞(hMSCs)，并在體外經VEGF、bFGF及ECGF因子向內皮細胞誘導分化(hMSC-ECs)，觀察細胞前后生物學特征，描述細胞周期及生長曲線；流式細胞儀(FCM)測定分化細胞的誘導率；免疫組化鑒定細胞表面抗原標志Vimentin及α-SMA，內皮細胞特異性標志抗原CD31、CD34、Ⅷ因子；并用Western blot方法測定Ⅰ型膠原蛋白，測定內皮細胞功能指標(NO，PGI2，ET-1及t-PA)，進行統(tǒng)計學比較分析。

3、>　　 結果：人大隱靜脈來源的內皮細胞分離培養(yǎng)初期生長增殖較慢，免疫組化染色示抗原CD34，CD31及Ⅷ因子陽性；人骨髓間充質干細胞分離培養(yǎng)生長增殖速度快，呈成纖維細胞方向生長；免疫組化示表達Vimentin及α-SMA，誘導后還表達CD31，CD34及Ⅷ因子相關抗原。Western blot結果顯示三種細胞均有分泌Ⅰ型膠原蛋白的功能；測定細胞功能示：hECs組中ET-1及PGI2的含量明顯高于其余兩組的含量；三組中細胞t-PA的含量

4、無明顯差異；NO含量測定示，hECs組與hMSC-ECs組間無明顯差異卻均明顯高于hMSCs組。凍存復蘇后細胞各項特性功能無明顯變化。
　　 結論：分別來源于人大隱靜脈和骨髓組織的hECs、hMSCs在體外利用膠原酶消化法和密度梯度離心法可以成功進行分離、培養(yǎng)及擴增，且在體外條件下可成功向內皮細胞方向誘導分化，以hMSCs誘導前后生長能力和細胞功能均較強，即使年齡處于中老年階段者仍然能分離出足夠的細胞數，獲取較為簡便，且已基本具