OPN對體外培養(yǎng)人OA軟骨細胞MMP13表達的影響.pdf

1、目的:采用骨橋蛋白干預體外培養(yǎng)的人骨關節(jié)炎軟骨細胞,觀察細胞生物學特性,檢測細胞培養(yǎng)上清液中MMP13的水平,探討骨橋蛋白參與人骨關節(jié)炎發(fā)病的可能機理。
　　 方法:1、采用Ⅱ型膠原酶消化法處理人關節(jié)軟骨標本獲取大量高純度的軟骨細胞,采用Ⅱ型膠原免疫組化法對其進行鑒定,臺盼藍染色法檢測軟骨細胞的存活率。2、正常關節(jié)軟骨細胞(A組)和OA關節(jié)軟骨細胞(B組)分別在空白和三種不同濃度OPN的干預作用下進行培養(yǎng):A1組(正常軟骨細胞空

2、白對照組),A2組(正常軟骨細胞2ng/ml OPN干預組),A3組(正常軟骨細胞4ng/ml OPN干預組),A4組(正常軟骨細胞6ng/ml OPN干預組),B1組(OA軟骨細胞空白對照組),B2組(OA軟骨細胞2ng/ml OPN干預組),B3組(OA軟骨細胞4ng/ml OPN干預組),B4組(OA軟骨細胞6ng/ml OPN干預組),MTT比色法檢測細胞存活及生長隋況;3、軟骨細胞培養(yǎng)48小時后,應用ELISA法檢測培養(yǎng)上清液

3、中MMP13的水平。
　　 結果:1、原代人正常軟骨細胞(A組)和OA軟骨細胞(B組)存活率分別為(95±1.0)％和(95±1.0)％,無顯著性差異(P＞0.05);2、加入OPN后倒置顯微鏡下觀察各組細胞間貼壁情況無明顯差別;細胞存活率分別為A1組(98±1.0)％;A2組(97±1.0)％;A3組(98±1.0)％;A4組(97.5±1.0)％;B1組(98.7±0.6)％;B2組(97.7±0.6)％;B3組(98±1.

4、0)％;B4組(97.7±1.5)％;各組間無顯著性差異(P＞0.05);3、軟骨細胞培養(yǎng)上清液MMP13水平比較結果:OPN干預正常軟骨細胞后各組間MMP13水平無顯著性差異(P＞0.05)。OPN干預O A軟骨細胞后,B2組與B1組、B4組與B1組間比較MMP13表達有顯著性差異(P＜0.05),其他各組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結論:1、本實驗觀察到體外培養(yǎng)OA軟骨細胞和正常軟骨細胞存活率無差異。2、本實驗觀