樹突狀細(xì)胞與白細(xì)胞介素18基因修飾的NCI-H460肺癌細(xì)胞融合體抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文樹突狀細(xì)胞與白細(xì)胞介素18基因修飾的NCIH460肺癌細(xì)胞融合體抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究姓名：張?jiān)谠粕暾?qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：吳金民2003.4.1浙江大學(xué)博士學(xué)位論文樹突狀細(xì)胞與白細(xì)胞介素18基因修飾的NCIH460肺癌細(xì)胞融合體抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)2000級(jí)博士研究生張?jiān)谠茖?dǎo)師吳金民教授中文摘要㈣(Dendriticcells，DC是目前所知功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(Antigenpres

2、entingcells，APC)，在機(jī)體的抗腫瘤免疫中具有重要作用?；贒C的腫瘤疫苗成為腫瘤免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)。Dc疫苗的構(gòu)建方法包括Dc體外擴(kuò)增后回輸，細(xì)胞因子基因修飾Dc，抗原基因轉(zhuǎn)染Dc，腫瘤細(xì)胞mRNA沖擊Dc、腫瘤抗原多肽沖擊Dc、腫瘤細(xì)胞裂解物沖擊Dc、腫瘤細(xì)胞與Dc融合等。其中腫瘤細(xì)胞與DC融合更具優(yōu)勢(shì)，較為理想。白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)一12、IL一7、IL—18、粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulo

3、cytemacmphagecolonystimulatingfactorGMCSF)等細(xì)胞因子具有較強(qiáng)的免疫促進(jìn)作用，與Dc疫苗聯(lián)用有望提商Dc疫苗的免疫效力，其中IL—18為多效性細(xì)胞因子，具有顯著的抗腫瘤作用，將IL18基因修飾與DC疫苗相結(jié)合可能會(huì)增強(qiáng)DC疫苗的免疫效應(yīng)。為探索更為高效的Dc瘤苗，本實(shí)驗(yàn)將腫瘤抗原、Dc的抗原呈遞功能和細(xì)胞因子IL一18的免疫刺激活性相結(jié)合，構(gòu)建含IL一12P40信號(hào)肽序列的I卜18融合基因，以其轉(zhuǎn)

4、染NCIH460肺癌細(xì)胞株，將此轉(zhuǎn)基因細(xì)胞與Dc融合，刺激活化T細(xì)胞，研究其在體外及動(dòng)物體內(nèi)的抗腫瘤作用，并與未轉(zhuǎn)染融合細(xì)胞及NCIH460細(xì)胞裂解物沖擊Dc誘導(dǎo)的T細(xì)胞的作用比較，以明確IL18修飾的Dc融合疫苗誘導(dǎo)的免疫作用是否優(yōu)于后二者。本實(shí)驗(yàn)分為五部分：第一部分Dc的誘導(dǎo)培養(yǎng)和鑒定分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PeripheralbloodmonoeuclearcellPBMC)，經(jīng)貼壁獲得單核細(xì)胞，用含GMCSF和IL4的培養(yǎng)液恒溫培