Celecoxib增強膠質(zhì)瘤細胞SHG44和U87-MG對γ射線的敏感性及其機制研究.pdf

1、目的：本課題通過研究COX-2選擇性抑制劑celecoxib對膠質(zhì)瘤細胞SHG44和U87-MG增殖能力的影響，探討celecoxib對細胞輻射敏感性的影響；通過對celecoxib作用后細胞COX-2 mRNA表達水平及60Co-γ線照射后細胞周期以及周期調(diào)控相關(guān)蛋白p53，cyclinD1，cyclinB1表達水平的檢測，、對celecoxib增敏機制進行初步探討。 方法： (1)利用MTT法檢測celecoxib對

2、膠質(zhì)瘤細胞SHG44和U87-MG存活分數(shù)的影響； (2)克隆形成法檢測膠質(zhì)瘤細胞的輻射敏感性、celecoxib對細胞輻射敏感性的影響； (3)應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)法檢測celecoxib對60Co-γ線照射后細胞COX-2 mRNA表達水平的影響； (4)用流式細胞儀檢測celecoxib對60Co-γ線照射后細胞周期分布改變； (

3、5)應(yīng)用WesternBlot法研究celecoxib對60Co-γ線照射后細胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白p53，cyclin D1，cyclinB1的影響； 結(jié)果： (1)Celecoxib的細胞增殖抑制作用具有濃度依賴性，其抑制作用隨濃度升高而增加；相同照射劑量下，細胞克隆形成率隨celecoxib濃度增加而減小，相同celecoxib濃度下，細胞克隆形成率隨照射劑量增加而減小，celecoxib濃度與輻射劑量對膠質(zhì)瘤細胞的輻

4、射增敏效應(yīng)存在交互作用；存活率為O．5時，SHG44和U87-MG細胞的輻射增強系數(shù)均隨celecoxib濃度增加而升高； (2)與對照組相比，celecoxib抑制細胞COX-2 mRNA表達水平；與單獨照射組相比，celecoxib抑制60Co-γ線照射后細胞COX-2 mRNA表達水平； (3)與對照組相比，celecoxib處理兩種細胞后G1期細胞比例均上升；與單獨照射組相比，celecoxib能降低輻射誘導(dǎo)的細

5、胞G2／M期阻滯； (4)Celecoxib處理后細胞cyclinD1蛋白水平均明顯降低，p53、cyclinB1蛋白水平均無明顯變化；celecoxib聯(lián)合60Co-γ線照射相比于單獨照射，細胞cyclinB1蛋白水平明顯降低。 結(jié)論： (1)低濃度celecoxib對腦膠質(zhì)瘤細胞無增殖抑制作用，較高濃度celecoxib劑量信賴性抑制細胞增殖；celecoxib能提高兩種腦膠質(zhì)瘤細胞對60Co-γ射線的輻射敏

6、感性，50μmol／Lcelecoxib對兩種細胞均有較好的輻射增敏作用； (2)Celecoxib對膠質(zhì)瘤細胞的輻射增敏機制與其抑制COX-2 mRNA表達水平密切相關(guān)，可能通過影響COX-2蛋白表達或其上游的底物、酶，抑制了射線誘導(dǎo)的COX-2蛋白上調(diào)，導(dǎo)致對膠質(zhì)瘤細胞的輻射增敏作用； (3)Celecoxib能誘導(dǎo)兩種膠質(zhì)瘤細胞G1期阻滯，celecoxib抑制輻射誘導(dǎo)活化的細胞G2／M期阻滯效應(yīng)，使更多輻射損傷細