內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)GABAB受體膜表達(dá)的影響.pdf

1、γ-氨基丁酸（GABA）B型受體為代謝型受體，屬于G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein coupled receptor，GPCR)家族。GABAB受體廣泛分布于哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，介導(dǎo)緩慢的、長(zhǎng)時(shí)程的突觸傳遞抑制效應(yīng)以調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性。興奮型受體與抑制型受體之間存在精細(xì)的平衡調(diào)控機(jī)制以維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能，一旦這種平衡被打破將會(huì)引發(fā)一系列神經(jīng)系統(tǒng)疾病。持續(xù)性谷氨酸受體的激活以及過(guò)度興奮引發(fā)的癲癇、神經(jīng)性疼痛疾病等均可下調(diào)GAB

2、AB受體的膜表達(dá)水平。
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，負(fù)責(zé)新生蛋白質(zhì)的合成、折疊以及轉(zhuǎn)運(yùn)等，此外還是脂類合成、鈣離子儲(chǔ)存的重要場(chǎng)所。包括缺氧、高糖、病毒感染等在內(nèi)的多種生理病理刺激都會(huì)導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的未折疊以及錯(cuò)誤折疊的蛋白的積累，引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進(jìn)而誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。研究證實(shí)，過(guò)度興奮誘導(dǎo)的癲癇、神經(jīng)性疼痛等疾病的發(fā)生發(fā)展都與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可有效保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，降低興奮性損傷。因而可推測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能參與調(diào)控

3、GABAB受體的膜表達(dá)。
　　本文以高表達(dá)GABAB受體的HEK293細(xì)胞為研究對(duì)象，探究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)GABAB受體膜表達(dá)的調(diào)控。首先利用 ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)了毒胡蘿卜素（Thapsigargin, TG）和衣霉素（Tunicamycin, TM）誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)GABAB受體膜表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激能顯著降低GABAB受體的膜表達(dá)水平，并且這種下調(diào)效應(yīng)具有亞型特異性（僅對(duì)GABABR1a亞型有影響而對(duì)GABABR

4、1b亞型無(wú)影響）。由于GABAB受體為異源二聚體，為探究?jī)蓚€(gè)亞基分別在其中所起的作用，在HEK293細(xì)胞中單獨(dú)轉(zhuǎn)染GABABR1a-ASA或GABABR2，ELISA結(jié)果顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)GABAB受體膜表達(dá)的影響僅依賴于GABABR1亞基。利用免疫熒光雙酶標(biāo)標(biāo)記膜上受體觀察不同處理時(shí)間受體的內(nèi)化程度，結(jié)果顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是通過(guò)調(diào)控受體的內(nèi)化過(guò)程影響其膜表達(dá)的。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)下游靶蛋白CHOP被報(bào)導(dǎo)與GABAB受體存在直接的相互作用。利用s

5、iRNA技術(shù)下調(diào)CHOP的表達(dá)，可顯著抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促GABAB受體內(nèi)化的效應(yīng)，同時(shí)降低了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)該受體膜表達(dá)水平的影響。因此，我們推測(cè)CHOP參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控GABAB受體內(nèi)化的過(guò)程。
　　綜上所述，本研究證實(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激顯著下調(diào)GABAB受體膜表達(dá)水平，且該效應(yīng)具有亞型特異性。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能通過(guò)CHOP調(diào)控GABAB受體的內(nèi)化過(guò)程，進(jìn)而影響該受體的膜表達(dá)。研究結(jié)果有助于闡明病理?xiàng)l件下GABAB受體膜表達(dá)下調(diào)的機(jī)制，同時(shí)有