TNF-α對人滑膜細胞RANKL、OPG mRNA表達的影響.pdf

1、目的：RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)是在破骨細胞分化、激活和凋亡過程中的一個重要信號調(diào)節(jié)系統(tǒng)。這一系統(tǒng)不僅參與調(diào)節(jié)生理性骨重建，也與病理狀態(tài)下多種骨病的發(fā)生密切相關。本實驗選用滑膜作為研究對象。TNF-α是目前發(fā)現(xiàn)的一種強有力的骨吸收誘導劑。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α可調(diào)節(jié)RANKL和OPG 的表達。在一些炎性關節(jié)疾病和發(fā)生人工關節(jié)無菌性松動的周圍組織中，TNF-α的水平是明顯升高的。盡管對骨溶解的原因已有許多研究，但對其機制一直不十分明確

2、。因而，探討TNF-α對人關節(jié)滑膜細胞中RANKL、OPG表達的影響，對于在細胞外分子信號傳遞水平進一步闡明關節(jié)內(nèi)骨質(zhì)破壞疾病和人工關節(jié)無菌松動的機理，并初步探索其預防及治療的藥物作用靶點有著重要的意義。
　　 方法：采用組織塊原代培養(yǎng)法分離人膝關節(jié)滑膜細胞并進行培養(yǎng)，通過形態(tài)學和免疫細胞化學方法觀察滑膜細胞生長情況。半定量RT-PCR方法檢測不同濃度TNF-α作用不同時間后滑膜細胞RANKL 和OPGmRNA水平表達的變化。<

3、br>　　 結(jié)果：組織塊法成功的培養(yǎng)出了人滑膜細胞，其中抗CD68 陽性細胞占1％左右，符合巨噬細胞樣滑膜細胞的特征；抗Vimentin 陽性細胞達99％以上，符合成纖維細胞樣滑膜細胞的特征。TNF-α能刺激人滑膜細胞RANKL 和OPG mRNA的表達。同時，TNF-α濃度在10ng/ml 時RANKL/OPG 比值較對照組升高（P<0.01），并且TNF-α作用12h和24h時，RANKL/OPG比值均明顯高于對照組（P<0.01

4、）。
　　 結(jié)論：滑膜細胞RANKL 和OPG在mRNA水平隨著TNF-α濃度的增加和作用時間的延長而表達增多，但是在一定濃度的TNF-α作用一定時間后RANKL增加的幅度比OPG大，所以RANKL/OPG 的比值是升高的。故TNF-α在一定濃度和時間能夠通過上調(diào)RANKL/OPG濃度比，影響RANKL/RANK/OPG信號系統(tǒng)的平衡，從而可能參與影響病變關節(jié)周圍骨破壞。這或許可以為伴隨骨質(zhì)破壞的炎性關節(jié)疾病和人工關節(jié)無菌性松動