胃蛋白酶、胰蛋白酶對大豆凝集素穩(wěn)定性的影響.pdf

1、本試驗以純化的大豆凝集素(SBA)為研究對象，體外研究了動物體內兩大主要蛋白消化酶，胃蛋白酶和胰蛋白酶對其降解作用。試驗通過SDS-PAGE凝膠電泳方法分析了SBA 經蛋白酶酶解后的降解程度；通過間接競爭ELISA方法測定其在酶解過程中的免疫活性的變化。 試驗中所用的提純SBA樣品是采用N-乙?；?D-半乳糖胺-Epoxy-Sepharose 6B親和層析體系進行分離提純而得到的。應用的抗SBA多克隆抗體是以純化的SBA免疫動物

2、而獲得，并采用飽和硫酸銨法對抗SBA多克隆抗體進行純化。利用提純SBA和純化后的抗SBA多克隆抗體，建立了SBA間接競爭ELISA檢測方法，檢測SBA在蛋白酶酶解過程中的活性變化。 在蛋白酶酶解SBA試驗中，將SBA設為五個濃度梯度和九個時間梯度進行酶解反應，試驗結果應用SPSS統(tǒng)計軟件中的Gereral Linear Model模塊進行統(tǒng)計分析。試驗期間，要求蛋白酶活性必須保持穩(wěn)定，因此參照中國2005藥典中胃蛋白酶和胰蛋白酶

3、的活性測定方法對其進行了實時監(jiān)測。 胃蛋白酶酶解SBA試驗結果表明：SBA可緩慢的被胃蛋白酶降解，SBA濃度越高，表現(xiàn)為完全降解時間越長，隨著SBA的降解，SBA的免疫活性也逐漸減小至消失，活性消失速度隨酶解時間的延長而逐漸變慢，并且，在本試驗的酶濃度下，SBA濃度越高活性減小的速度越快，但活性完全消失的時間延長。 胰蛋白酶作用SBA試驗結果表明：SBA不能被胰蛋白酶降解，并且酶解過程中SBA的活性也保持完好，說明SBA

4、對胰蛋白酶有很好的穩(wěn)定性。 綜上所述，SBA是一種可以被胃蛋白酶降解的蛋白質，但較長的作用時間和一定胃蛋白酶濃度，一旦胃中的胃蛋白酶未能將其完全降解，SBA進入腸道后又不能被胰蛋白酶降解，有活性的SBA將與小腸黏膜上皮細胞上的特異性受體結合，破壞腸粘膜結構，部分被內吞入上皮細胞，進入循環(huán)系統(tǒng)，進而對動物體產生一系列的抗營養(yǎng)作用。因此富含豆類的食品和飼料在加工處理階段對凝集素進行滅活及國家質檢部門對其進行含量的嚴格檢測是十分必要的